Ad-p27mt對(duì)肝癌細(xì)胞及裸鼠移植瘤生成抑制和凋亡的影響.pdf

1、目前認(rèn)為，腫瘤的發(fā)生主要有兩方面的原因，一是腫瘤細(xì)胞的凋亡障礙，二是細(xì)胞異常增殖，也就是細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制紊亂、細(xì)胞周期調(diào)控蛋白失調(diào)，導(dǎo)致細(xì)胞生長失控。細(xì)胞周期受到信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和反饋環(huán)路的嚴(yán)密調(diào)控，這個(gè)過程是否正常與細(xì)胞的生長、分化、衰老及癌變密切相關(guān)，因此腫瘤不僅僅是增殖、分化異常的疾病，更是凋亡異常的疾病，調(diào)控細(xì)胞增殖和凋亡目前逐漸成為腫瘤治療研究的一個(gè)新熱點(diǎn)。P27是新近發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因，P27蛋白作為一種調(diào)控細(xì)胞周期的樞紐蛋白，

2、可以以多種方式調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖或凋亡。其抗癌機(jī)制已成為生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的重要研究課題。對(duì)p27基因進(jìn)行修飾，使其編碼的第187位氨基酸(蘇氨酸)突變?yōu)榈鞍彼峄虮彼岫傻耐蛔冃蚿27基因(p27mt)編碼產(chǎn)生的蛋白能抗降解、更穩(wěn)定，具有比野生型p27基因(p27wt)更強(qiáng)的抑制腫瘤細(xì)胞生長及誘導(dǎo)凋亡活性。
　　 目的：應(yīng)用Ad-p27mt轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞SMMC-7721及其裸鼠移植瘤，探討外源性突變型p27對(duì)人源性肝癌細(xì)胞SMMC

3、-7721和裸鼠移植瘤生長抑制和凋亡的影響。
　　 方法：方法一：將腺病毒介導(dǎo)的突變型p27cDNA(Ad-p27mt)轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞SMMC-7721，Western blotting檢測(cè)p27、Bcl-2、Bax的表達(dá)；流式細(xì)胞儀(FCM)、H3-TdR 摻入法等觀察Ad-p27mt對(duì)肝癌細(xì)胞生長抑制作用，DNA片段分析及TUNEL檢測(cè)細(xì)胞凋亡。方法二：Ad-p27mt注射入肝癌裸鼠移植瘤中，繪制腫瘤生長曲線，計(jì)算腫瘤生長抑

4、制率，免疫熒光法檢測(cè)p27的表達(dá)。
　　 結(jié)果：Ad—p27mt轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞后，p27表達(dá)增強(qiáng)，Bax/Bcl-2比例增高,細(xì)胞增殖明顯受抑制，G0/G1期細(xì)胞比例增加，明顯產(chǎn)生凋亡.采用Ad—p27mt基因治療肝癌裸鼠移植瘤生長受抑制，腫瘤生長抑制率達(dá)57.09％。
　　 結(jié)論：Ad-p27mt基因轉(zhuǎn)染對(duì)肝癌具有較顯著的體內(nèi)、外抑制作用和誘導(dǎo)凋亡作用，其機(jī)制是通過增強(qiáng)p27表達(dá)，使細(xì)胞產(chǎn)生周期阻滯,誘導(dǎo)凋亡的機(jī)理可能是