MicroRNA-30b在胃癌中的功能及新輔助化療應(yīng)用于進展期胃癌的研究.pdf

1、背景:早期診斷困難、化療耐藥、缺乏有效的預(yù)后指標(biāo)是目前胃癌研究領(lǐng)域的重要難題，限制了胃癌患者昀總體預(yù)后。尋找新的診斷標(biāo)記物，深入了解胃癌發(fā)生、發(fā)展機制，逆轉(zhuǎn)化療耐藥是改善胃癌患者預(yù)后的重要手段。
　　MicroRNAs(miRNAs)是一類長約22個核苷酸的非編碼單鏈小分子RNA，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展、增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及化療耐藥等多個方面發(fā)揮重要作用。MiR-30b在結(jié)直腸癌、宮頸癌、乳腺癌等腫瘤中表達降低，參與多種腫瘤生物學(xué)表型的調(diào)

2、控。但是其在胃癌中的表達水平、調(diào)控作用及機制尚不明確。因此，檢測胃癌中miR-30b的表達水平，深入研究miR-30b的調(diào)控作用及機制，對于明確其在胃癌診斷、判斷預(yù)后等方面具有重要的意義。
　　新輔助化療作為腫瘤綜合治療的一部分，已經(jīng)逐漸被引用至局部進展期胃癌的治療上。新輔助化療應(yīng)用于胃癌的手術(shù)之前，具有以下優(yōu)點:提高切除率，降低腫瘤的分期，相比于單純手術(shù)，還可以減少淋巴結(jié)和血管的轉(zhuǎn)移。術(shù)前患者的營養(yǎng)狀況良好，可以更好的耐受化療的

3、副反應(yīng)。近年來，國內(nèi)外關(guān)于胃癌新輔助化療的研究都顯示新輔助化療有明顯的效果。但是，新輔助化療方案沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，化療藥物、化療周期的選擇及療效評價的時間都存在爭議。
　　目的:
　　(1)探討血清癌胚抗原(CEA)、糖類抗原19-9(CA19-9)、糖類抗原242(CA242)及糖類抗原50(CA50)聯(lián)合檢測在胃癌患者診斷、臨床病理因素及預(yù)后判斷的價值。
　　(2)探索miR-30b對胃癌細(xì)胞株增殖、凋亡、侵襲及遷移

4、等惡性表型的調(diào)控作用。明確miR-30b的調(diào)控的靶基因及信號通路。
　　(3)評估進展期胃癌患者行新輔助治療后的臨床病理特征及效果。評估空腸穿刺置管早期腸內(nèi)營養(yǎng)支持治療對接受新輔助化療并手術(shù)胃癌患者的營養(yǎng)狀況和并發(fā)癥的影響。
　　方法:
　　(1)收集181例于我院行手術(shù)治療的胃癌患者臨床資料，回顧性分析其術(shù)前血清CEA、CA19-9、CA242及CA50的水平。通過ROC曲線，對四項腫瘤標(biāo)志物單獨和不同組合方式診斷胃

5、癌的敏感性進行比較分析。單因素及多因素生存分析探討腫瘤標(biāo)志物與患者術(shù)后病理及生存預(yù)后的關(guān)系。
　　(2)通過實時定量PCR法檢測miR-30b的表達水平;CCK8法檢測細(xì)胞增殖;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡;transwell法檢測細(xì)胞侵襲和遷移能力;western blot檢測蛋白表達水平;雙螢光素酶報告基因?qū)嶒烌炞CmiR-30b的靶基因。
　　(3)分析2007年2月至2015年3月于北京協(xié)和醫(yī)院收治接受術(shù)前化療和手術(shù)的115

6、例胃癌患者的臨床病例資料，所有患者采用Xelox化療方案，奧沙利鉑130mg/m2靜脈滴入＞2h，第一天;口服卡培他濱1000mg/m2，第1-2周，后休息一周。三周為一療程，患者至少接受2周期的術(shù)前化療。評估新輔助化療的療效、毒副反應(yīng)及與患者預(yù)后的關(guān)系。通過檢測臨床及實驗室指標(biāo)，評估空腸穿刺置管腸內(nèi)營養(yǎng)對胃癌患者術(shù)后營養(yǎng)狀況及并發(fā)癥的影響。
　　結(jié)果：
　　(1)腫瘤標(biāo)志物CEA、CA19-9、CA242及CA50檢測胃癌

7、的陽性率分別為17.67，17.12，20.44和13.81％。四項腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測的陽性率為36.57％。術(shù)前血清CEA、CA19-9、CA242和CA50升高的胃癌患者，其腫瘤臨床分期也較晚，并且有較差的總生存率。術(shù)前血清CEA、CA19-9、CA242和CA50升高的胃癌患者，5年生存率分別為28.12，25.83，27.02和24.05％，而術(shù)前此四項腫瘤標(biāo)志物正常的患者5年生存率則分別為55.01，55.37，56.36，5

8、4.51％(P＜0.01)。Cox比例風(fēng)險模型行多因素分析示升高的CA242可作為判斷胃癌預(yù)后差的獨立因素。
　　(2)miR-30b表達水平在胃癌組織中明顯下降。miR-30b低表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，miR-30b在23對胃癌組織中的表達與患者的年齡、性別和Lauren分型無明顯相關(guān)性。
　　(3)CCK-8實驗結(jié)果顯示，過表達miR-30b可明顯抑制胃癌細(xì)胞的生長。相反，將miR-30b inhibitor轉(zhuǎn)染至胃癌

9、細(xì)胞降低miR-30b的表達，結(jié)果顯示明顯促進了胃癌細(xì)胞生長。流式細(xì)胞儀檢測了miR-30b對于胃癌細(xì)胞凋亡的影響，表明過表達miR-30b可以誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞的凋亡。在胃癌細(xì)胞中過表達miR-30b，可以顯著的抑制穿過小室孔膜的細(xì)胞數(shù)，抑制胃癌細(xì)胞侵襲遷移能力。相反，轉(zhuǎn)染inhibitor下調(diào)miR-30b在胃癌細(xì)胞的表達水平，則促進了胃癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。
　　(4)通過構(gòu)建包含種子區(qū)的野生型和突變型雙螢光素酶報告基因載體，并分別與

10、miR-30b mimics或mimics control共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)共轉(zhuǎn)染mimics與野生型載體的細(xì)胞的熒光素酶活性顯著低于共轉(zhuǎn)染mimics與突變型載體，mimics control與野生型載體，提示EIF5A2是miR-30b的直接靶基因。
　　(5)miR-30b可能通過下調(diào)EIF5A2進而激活上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的相關(guān)指標(biāo)E-cadherin和β-catenin，抑制了腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。
　　(6)對新輔助

11、化療并行手術(shù)治療的患者進行分析，完全緩解(CR)2例，部分緩解(PR)55例，穩(wěn)定(SD)47例，進展(PD)有11例，化療有效率為49.6％，疾病控制率為90.4％。術(shù)前T分期的降期率為48.7％?；熀笞畛Ｒ姷牟涣挤磻?yīng)為白細(xì)胞減少(16.5％)和胃腸道反應(yīng)(12.2％)，多為Ⅰ-Ⅱ度。經(jīng)過對癥治療后均可得到緩解。接受新輔助化療和手術(shù)的患者中位生存期48個月，5年生存率42.4％。化療療效為PR的患者生存期明顯優(yōu)于SD和PD的患者，差

12、異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。GPS評分(Glasgow prognostic score)較低的患者對于術(shù)前化療有較好的緩解(P=0.028)。多因素回歸比例模型分析顯示化療反應(yīng)性(P=0.026)、腫瘤pTNM分期(P=0.037)、Lauren分型(P=0.033)和GPS評分(P=0.002)為新輔助化療胃癌患者預(yù)后的獨立因素。
　　(7)術(shù)后第3、7天，置管的腸內(nèi)營養(yǎng)組白蛋白水平要高于不置管的腸外營養(yǎng)組患者;術(shù)后第

13、3天，前白蛋白水平在置管組要高于不置管組。經(jīng)空腸穿刺管營養(yǎng)可以促進患者早日排氣，并且對肝功能具有保護作用。兩組患者的生存期尚未觀察到明顯差別。
　　結(jié)論:
　　(1)聯(lián)合檢測CEA、CA19-9、CA242和CA50可以提高胃癌診斷的陽性率。CA242有較高的診斷價值。在可切除的胃癌患者中，術(shù)前的CA242與胃癌的分期有關(guān)，其是胃癌患者預(yù)后的獨立預(yù)測因子;
　　(2)miR-30b在胃癌組織中及胃癌細(xì)胞中低表達;過表達

14、miR-30b可以抑制胃癌細(xì)胞增殖、促進細(xì)胞凋亡，抑制胃癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移;
　　(3)EIF5A2是miR-30b的直接靶基因，miR-30b可能通過下調(diào)EIF5A2進而激活上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的相關(guān)指標(biāo)E-cadherin和β-catenin，抑制了腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移;
　　(4)Xelox新輔助化療方案對于進展期胃癌患者有較好的有效率，化療毒副反應(yīng)不重。新輔助化療后取得明顯臨床緩解的患者預(yù)后要好?；煼磻?yīng)性、術(shù)后病理分期、Lau