內(nèi)源性H2S-CSE體系、NF-κB、ICAM-1在敵敵畏致大鼠ARDS時(shí)的變化及相關(guān)性研究.pdf

1、目的：觀察敵敵畏致大鼠ARDS時(shí)內(nèi)源性H2S/CSE體系的變化及對(duì)核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子和粘附分子的影響。
　　方法：
　　1.將健康的48只成年雄性SD大鼠，隨機(jī)分成對(duì)照組和敵敵畏組，即生理鹽水對(duì)照組和敵敵畏組，對(duì)照組大鼠予生理鹽水2ml灌胃，敵敵畏組大鼠予以2ml敵敵畏溶液灌胃，用生理鹽水將35mg/Kg的敵敵畏稀釋成2ml。分別于下列時(shí)間點(diǎn)3h、6h、12h、24h隨機(jī)處死兩組實(shí)驗(yàn)大鼠中的6只。
　　2.在各時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行以肺

2、組織肉眼及鏡下觀察，進(jìn)行肺損傷病理評(píng)分，監(jiān)測(cè)動(dòng)脈血氧分壓及 W/D在各時(shí)間點(diǎn)的變化，BCA法測(cè)定BALF中蛋白的含量，去蛋白法測(cè)血漿中硫化氫含量、亞甲基藍(lán)法測(cè)肺組織CSE活性，肺組織切片行HE染色觀察其病理變化、RT-PCR法測(cè)定肺組織中ICAM-1mRNA基因表達(dá)；western-blot法測(cè)定肺組織NF-κBp65的蛋白表達(dá)活性。
　　結(jié)果：
　　1.大體肉眼觀：對(duì)照組大鼠肺形態(tài)結(jié)構(gòu)大致正常。敵敵畏組3h組可見肺充血、水

3、腫。隨著時(shí)間延長(zhǎng)肺損傷逐漸加重，可見肺組織表面呈暗紅色、可見點(diǎn)片狀出血。損傷在6h至頂峰，12-24h肺損傷有所回落。
　　2.鏡下觀：對(duì)照組大鼠于各個(gè)實(shí)驗(yàn)觀測(cè)時(shí)間點(diǎn)，其肺組織結(jié)構(gòu)均正常。而敵敵畏組大鼠，在實(shí)驗(yàn)時(shí)間3h到6h，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，肺組織的受損越明顯，可見肺泡間隔增寬，肺泡腔內(nèi)明顯可見炎性滲出，大批炎性細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象。甚至可見部分肺泡腔內(nèi)出現(xiàn)出血現(xiàn)象。隨著時(shí)間增長(zhǎng)，肺損傷越嚴(yán)重，肺損傷在6h達(dá)到高峰，12-24h肺損傷較前

4、減輕，但至24h仍有肺泡間隔增寬，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，少量紅細(xì)胞滲出，偶見透明膜的形成。
　　3.肺損傷病理評(píng)分：敵敵畏組大鼠肺損傷病理評(píng)分與對(duì)照組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比明顯上升（P＜0.01），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，3h-6h隨著時(shí)間延長(zhǎng)，肺部損傷越嚴(yán)重，病理的評(píng)分值越高，且在6h的時(shí)候，病理評(píng)分最高。在12h到24h，有所下降，但并未恢復(fù)。
　　4.大鼠 PaO2變化及其與肺損傷病理評(píng)分的相關(guān)性分析：對(duì)照組大鼠的動(dòng)脈血氧分壓在各實(shí)驗(yàn)觀測(cè)時(shí)間點(diǎn)

5、，無明顯異常。敵敵畏組大鼠均出現(xiàn)PaO2降低（P<0.01），并在6h PaO2降至最低值。12-24h有所回升。大鼠PaO2變化與肺損傷病理評(píng)分呈負(fù)相關(guān)。
　　5.大鼠肺W/D的變化及其與肺損傷病理評(píng)分的相關(guān)性分析對(duì)照組大鼠肺W/D在各組中無明顯變化。敵敵畏組各組肺組織W/D均升高（P<0.01），并在6h達(dá)到峰值，12-24h可見下降趨勢(shì)。但未恢復(fù)正常。相關(guān)性分析顯示：敵敵畏組大鼠 W/D值與肺損傷病理評(píng)分值呈正相關(guān)。

6、　　6. BALF中蛋白含量的變化及其與肺損傷病理評(píng)分的相關(guān)性分析：對(duì)照組各組大鼠肺泡灌洗液中蛋白濃度在均未見明顯變化。敵敵畏組大鼠各組大鼠肺泡灌洗液中蛋白含量均升高（P<0.01）。并在6h達(dá)到峰值，12-24h可見下降趨勢(shì)。但未恢復(fù)正常。相關(guān)性分析顯示：大鼠BALF中蛋白含量值隨著肺損傷病理評(píng)分值的升高呈升高趨勢(shì)。
　　7.大鼠血漿中H2S含量和肺組織CSE活性的變化及二者與肺損傷病理評(píng)分的相關(guān)性分析：對(duì)照組大鼠的血漿中H2S

7、含量以及肺組織CSE活性在各實(shí)驗(yàn)觀測(cè)時(shí)間點(diǎn)上，沒有顯著變化。敵敵畏組中大鼠在相同的實(shí)驗(yàn)觀測(cè)時(shí)間點(diǎn)上，H2S的含量和CSE的活性都有出現(xiàn)降低。在6h的時(shí)候，H2S含量及CSE活性降至最低，12h到24h過程中，有所回升，但是依舊沒有恢復(fù)正常。根據(jù)相關(guān)性分析：血漿里 H2S含量和肺組織里面CSE活性與病理評(píng)分呈負(fù)相關(guān)。
　　8. NF-κBp65蛋白表達(dá)的變化將敵敵畏組與對(duì)照組進(jìn)行比較得出：肺組織中 NF-κBp65表達(dá)均明顯升高，且

8、均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；在6h的時(shí)候，NF-κBp65增至最高值。在12h到24h之間，NF-κBp65含量開始減少，但依舊沒有恢復(fù)到正常水平。
　　9.肺組織中ICAM-1mRNA的變化：將敵敵畏組與對(duì)照組進(jìn)行比較，肺組織中ICAM-1 mRNA的含量出現(xiàn)持續(xù)升高，在6h的時(shí)候，該含量升至最高值，從12h開始該含量有所下降。到24h，ICAM-1 mRNA依舊沒有恢復(fù)正常水平。
　　結(jié)論：
　　1.在敵敵畏致