人參皂甙Rb1對(duì)老齡小鼠海馬PI3K-Akt通路及突觸素蛋白改變的影響.pdf

1、目的：
　　衰老是一種不可逆的自然規(guī)律，其中腦衰老為主要的衰老形式，而學(xué)習(xí)記憶能力的減退是大腦衰老的重要表現(xiàn)之一。隨著我國人口老齡化，輕度認(rèn)知障礙、阿爾茨海默病等神經(jīng)系統(tǒng)老化疾病的患者大量出現(xiàn)。因此，對(duì)于腦老化及學(xué)習(xí)記憶功能減退的發(fā)病機(jī)制和治療措施的研究是迫切需要的解決問題。
　　目前關(guān)于腦衰老的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡述清楚，許多科學(xué)家提出了多種假說，如膽堿能學(xué)說、氧化應(yīng)激學(xué)說、基因突變學(xué)說及分子交聯(lián)學(xué)說等，但目前尚無定論。其中

2、多項(xiàng)研究表明，PI3K/Akt信號(hào)通路參與神經(jīng)細(xì)胞存活、凋亡及突觸可塑性的改變，而這種改變與學(xué)習(xí)記憶能力密切相關(guān)。同時(shí)我們前期的研究表明人參皂甙Rb1在學(xué)習(xí)記憶環(huán)路中發(fā)揮著正向的促進(jìn)作用。但是，關(guān)于人參皂甙Rb1對(duì)海馬衰老機(jī)制中PI3K/Akt信號(hào)通路變化調(diào)節(jié)及其對(duì)突觸可塑性影響的研究國內(nèi)外尚少見報(bào)道。
　　因此，本研究希望通過給予自然老化的小鼠人口服參皂甙Rb1的方法，觀察小鼠海馬PI3K/Akt信號(hào)通路與突觸可塑性相關(guān)蛋白表達(dá)

3、的相互關(guān)系，以闡述腦老化的發(fā)病機(jī)制并驗(yàn)證人參皂甙Rb1對(duì)學(xué)習(xí)記憶功能影響的作用機(jī)理。
　　方法：
　　一、動(dòng)物模型建立及分組
　　動(dòng)物購自中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心的0月齡ICR小鼠，共50只，隨機(jī)分三組飼養(yǎng)，即青年組（10只），老齡組（20只）和老齡給藥組（20只）。老齡組為自然衰老的21個(gè)月齡小鼠;老齡給藥組小鼠從老齡前期18月齡開始口服人參皂甙Rb1(20 mg.kg-1·d-1)至21個(gè)月齡。到預(yù)定時(shí)間后，三組同

4、時(shí)取材觀察海馬CA3區(qū)的變化，檢測(cè)海馬PI3K/Akt信號(hào)通路(Akt、p-Akt)的變化及突觸相關(guān)蛋白SYN的改變。
　　二、Morris水迷宮行為學(xué)測(cè)試
　　在模型建立前后及人參皂甙Rb1處理后分別進(jìn)行定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)，用于測(cè)試小鼠對(duì)水迷宮學(xué)習(xí)記憶的獲取能力及小鼠對(duì)原平臺(tái)空間位置的記憶存儲(chǔ)能力。
　　三、免疫組織化學(xué)標(biāo)本制備及染色方法
　　采用免疫組織化學(xué)SP方法觀察Akt、p-Akt和SYN在海馬

5、CA3區(qū)神經(jīng)元的表達(dá)及分布。
　　四、Western blotting方法
　　采用Western blotting方法檢測(cè)P-Akt，Akt及突觸可塑性相關(guān)蛋白SYN在海馬神經(jīng)元的表達(dá)。
　　五、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，上述所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示。各組ColⅣ和GFAP的比較采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，Westernblotting的結(jié)果采用單因素方差分析

6、，以P＜0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　一、Morris水迷宮行為學(xué)測(cè)試
　　水迷宮定位航行試驗(yàn)結(jié)果表明:老齡組小鼠各時(shí)間段的平均逃避潛伏期較青年組明顯延長(P＜0.05)，而給藥組較老齡組各時(shí)間段的平均逃避潛伏期明顯縮短(P＜0.05)?？臻g探索試驗(yàn)結(jié)果表明:老齡組較青年組小鼠穿越原平臺(tái)位置次數(shù)明顯減少(P＜0.05)，而給藥組較老齡組小鼠穿越原平臺(tái)位置次數(shù)有所增加((P＜0.05)。
　　二、免疫

7、組織化學(xué)方法
　　（一）突觸素蛋白的表達(dá)
　　老齡組小鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元SYN蛋白光密度值較青年對(duì)照組明顯降低(P＜0.05)，而給藥組較老齡組SYN蛋白光密度值明顯增加(P＜0.05)。
　?。ǘ〢kt蛋白的表達(dá)
　　老齡組小鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元Akt蛋白光密度值較青年對(duì)照組明顯降低(P＜0.05)，而給藥組較老齡組Akt蛋白光密度值無明顯改變(P＞0.05)。
　?。ㄈ㏄-Akt蛋白的表達(dá)

8、　　老齡組小鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元P-Akt蛋白光密度值較青年對(duì)照組明顯降低(P＜0.05)，而給藥組較老齡組P-Akt蛋白光密度值明顯增加(P＜005）。
　　三、Western blotting方法
　?。ㄒ唬┩挥|素蛋白的表達(dá)
　　各組SYN相對(duì)含量比較:老齡組與青年組相比突觸可塑性相關(guān)蛋白SYN表達(dá)明顯下降(P＜0.05);給藥組與老齡組相比SYN表達(dá)明顯增加(P＜0.05)。
　?。ǘ〢kt蛋白的表達(dá)

9、r>　　各組Akt相對(duì)含量比較:老齡組與青年組相比Akt蛋白的表達(dá)明顯下降(P＜0.05);給藥組與老齡組相比Akt蛋白的表達(dá)無明顯差異（P＞0.05）。
　?。ㄈ㏄-Akt蛋白的表達(dá)
　　各組P-Akt相對(duì)含量比較:老齡組與青年組相比P-Akt表達(dá)明顯下降(P＜0.05);給藥組與老齡組相比P-Akt表達(dá)明顯增加(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、免疫組織化學(xué)及Western blotting結(jié)果均表明: