p38MAPK抑制劑對實驗性自身免疫性腦脊髓炎保護作用的病理學研究及機制探討.pdf

1、目的:多發(fā)性硬化(multiple sclerosis，MS)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質的炎性脫髓鞘性疾病，其發(fā)病機制尚無定論，近年來研究表明，MS是遺傳、環(huán)境等因素共同作用而發(fā)生的自身免疫過程，其中少突膠質細胞損傷引起的髓鞘脫失是MS的主要病理特點，因此我們可以看出少突膠質細胞在MS的病理過程中起重要作用。p38MAPK是絲裂素蛋白酶激活物(mitogen-activated protein kinase，MAPKs)家族中的一員，它對細

2、胞內外的多種信號發(fā)生反應，對細胞的適應、增殖、分化、存活等有重要的調節(jié)作用，并參與多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理過程。前期的研究表明，抑制p38MAPK可以減輕實驗性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmuneencephalomyelitis，EAE)小鼠神經(jīng)組織的脫髓鞘，但有細胞實驗研究提出，p38MAPK可以促進外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的少突膠質細胞的分化、再生。因此在EAE中，抑制p38MAPK后對少突膠質細胞系的具

3、體影響如何仍有待進一步研究。本課題研究p38MAPK抑制劑對EAE小鼠脊髓組織髓鞘、少突膠質細胞的影響，探討p38MAPK抑制劑對EAE模型起保護作用的機制，為MS的治療提供新的思路。
　　方法:以MOG35-55為抗原免疫54只C57BL/6小鼠建立EAE模型。小鼠隨機分為3組，分別為正常對照組、EAE對照組、p38MAPK抑制劑干預組。自EAE免疫當天，p38抑制劑組小鼠給予SB2035800.2mg/kg每日腹腔注射;正常對

4、照組及EAE組小鼠給予等量的生理鹽水每日腹腔注射。觀察小鼠的發(fā)病情況、體重變化及神經(jīng)功能評分。于免疫后第20天（約相當于小鼠發(fā)病高峰期）處死小鼠。取小鼠脊髓腰膨大部位的組織進行HE染色觀察炎性細胞浸潤情況，透射電鏡和LFB髓鞘染色從病理學和形態(tài)學觀察髓鞘脫失和軸索損傷情況，并進行p38、p-p38、olig2的免疫組織化學染色對比陽性細胞個數(shù)觀察p38MAPK抑制劑對EAE小鼠細胞中p38及p-p38的影響，并進一步探究其是否可以提高o

5、lig2的表達發(fā)揮促進髓鞘再生的作用。采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，發(fā)病率用百分數(shù)表示，組間比較采用卡方檢驗，計量資料以均數(shù)±標準差（(x)±S）表示，多組計量資料均數(shù)的比較應用ANOVA方差分析，組間兩兩比較采用Dunnett-t檢驗，P＜0.05差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　1、各組小鼠臨床表現(xiàn)觀察:正常對照組小鼠未發(fā)病。發(fā)病高峰期p38MAPK抑制劑組小鼠與EAE組小鼠相比，其發(fā)病率、體重減輕程度及神

6、經(jīng)功能評分明顯降低(P＜0.05)。
　　2、HE染色:于發(fā)病高峰期EAE組、p38MAPK抑制劑組與正常對照組比較，小鼠脊髓組織中的炎性細胞浸潤數(shù)明顯增多(P＜0.05);p38MAPK抑制劑組與EAE組相比較，小鼠脊髓組織炎性細胞浸潤數(shù)明顯減少(P＜0.05)。
　　3、LFB染色:EAE組發(fā)病高峰期可見大小不等的斑片狀脫髓鞘區(qū)，脊髓白質內的藍色髓鞘區(qū)域減少，部分甚至可見空泡樣變性;p38MAPK抑制劑組發(fā)病高峰期可見些

7、許小的髓鞘脫失區(qū)。正常對照組無脫髓鞘區(qū)。
　　4、透射電鏡:發(fā)病高峰期EAE組小鼠髓鞘的層狀結構排列極為松散，部分髓鞘崩解，斷裂，脫失，軸索萎縮變性，結構不清晰;p38MAPK抑制劑組可見髓鞘排列松散，髓鞘崩解脫失現(xiàn)象及軸索萎縮變性均較少，結構尚清晰。
　　5、p38免疫組織化學:正常對照組、EAE組及p38MAPK抑制劑組小組脊髓p38免疫陽性細胞數(shù)無明顯差異(p＞0.05)。
　　6、p-p38免疫組織化學:EAE

8、組與正常對照組相比，p-p38陽性細胞數(shù)明顯增多，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;p38MAPK抑制劑組p-p38陽性細胞數(shù)較正常對照組無明顯差異（P＞0.05）;p38MAPK抑制劑組與EAE組相比，陽性細胞數(shù)下降，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　7、olig2免疫組織化學:發(fā)病高峰期p38MAPK抑制劑組免疫陽性細胞平均數(shù)目均較EAE組免疫陽性細胞平均數(shù)目增多，差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結論: