Fcα-μR介導(dǎo)補(bǔ)體對(duì)人腎小球系膜細(xì)胞的殺傷.pdf

1、本論文分為兩部分，第一部分針對(duì)Fcα/μR在人腎小球系膜細(xì)胞上的功能和在IgM腎?。↖gMN）發(fā)病中可能的病理意義進(jìn)行了探索。IgMN是以腎小球系膜區(qū)IgM沉積為主的原發(fā)性系膜增生性腎小球腎炎，但是IgM及IgM-IC在系膜區(qū)沉積的機(jī)制一直不明確。Fcα/μR是能夠和IgA或IgM以中等親和力或高親和力結(jié)合的Fc受體，并在原代培養(yǎng)的腎小球系膜細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)有表達(dá)。為了研究Fcα/μR是否可能促進(jìn)IgM及IgM-IC在腎小球系膜細(xì)胞上沉積，本

2、實(shí)驗(yàn)建立了表達(dá)人Fcα/μR的HMC細(xì)胞系，并對(duì)其結(jié)合IgM，IgA及IgM-IC的情況進(jìn)行了鑒定。在建立細(xì)胞穩(wěn)定株過(guò)程中，嘗試使用逆轉(zhuǎn)錄病毒，慢病毒和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法后，最后選定利用脂質(zhì)體將Fcα/μR cDNA轉(zhuǎn)染入人腎小球系膜細(xì)胞（HMC），藥物篩選后進(jìn)行克隆化培養(yǎng)。利用Western blot檢測(cè)到Fcα/μR在HMC中表達(dá)，激光共聚焦顯微術(shù)檢測(cè)到其在細(xì)胞膜的表達(dá)。用流式細(xì)胞術(shù)與激光共聚焦顯微術(shù)檢測(cè)到IgM，IgA以及IgM-IC

3、能通過(guò)Fcα/μR與HMC-Fcα/μR結(jié)合。考慮到IgMN中IgM沉積常伴有補(bǔ)體C3片段沉積，而IgM-IC是很強(qiáng)的補(bǔ)體激活劑，我們又對(duì)HMC-Fcα/μR結(jié)合IgM-IC以后介導(dǎo)補(bǔ)體對(duì)細(xì)胞的殺傷情況進(jìn)行了研究。用臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞殺傷作用。在補(bǔ)體作用下，HMC-Fcα/μR死亡率顯著高于對(duì)照組野生型細(xì)胞，空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞及無(wú)IgM-IC結(jié)合的HMC-Fcα/μR（P<0.001）。以上結(jié)果表明，F(xiàn)cα/μR能結(jié)合IgM-I

4、C并介導(dǎo)補(bǔ)體殺傷人腎小球系膜細(xì)胞。
　　 第二部分主要探討了IgAN病人外周血B細(xì)胞永生化的方法。為了對(duì)IgAN中異常糖基化IgA1的來(lái)源進(jìn)行研究，需要有充分穩(wěn)定的分泌IgA1細(xì)胞樣本，但是臨床樣本十分有限，所以有必要采用EB病毒轉(zhuǎn)化病人外周血B細(xì)胞的方法，來(lái)獲得永生化的細(xì)胞系。通過(guò)實(shí)驗(yàn)成功建立起了IgAN病人，其他腎病病人和正常人的永生化B細(xì)胞系，并建立起可以用雙抗體夾心ELISA檢測(cè)IgA的方法，利用這種方法檢測(cè)到永生化細(xì)胞