Paxillin反義寡核苷酸對(duì)食管癌EC9706細(xì)胞中paxillin表達(dá)抑制作用.pdf

1、食管癌是常見的惡性腫瘤之一，中國(guó)是世界上食管癌高發(fā)國(guó)家、也是世界上食管癌高死亡率的國(guó)家之一，河南省是食管癌的高發(fā)省份。目前的治療方法對(duì)中、晚期食管癌而言，療效均不太滿意，并有一定的局限性，因此尋找新的更有效的治療食管癌的方法，已成為近年來的研究熱點(diǎn)之一。
　　 樁蛋白(paxillin)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種重要的細(xì)胞黏附因子，是致瘤性酪氨酸激酶的一種底物，與整合素相關(guān)聯(lián)，構(gòu)成細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)局部黏附關(guān)鍵部位，調(diào)節(jié)細(xì)胞的移動(dòng)和播散等

2、功能，從而提高腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲的能力。Paxillin作為一種信號(hào)接頭蛋白，在多種細(xì)胞外刺激引起的信號(hào)傳導(dǎo)中發(fā)揮作用。研究表明paxillin有參與動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)黏著斑、調(diào)節(jié)細(xì)胞的移動(dòng)和播散等功能。而腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移與細(xì)胞的黏附力、移動(dòng)力的改變直接相關(guān)，提示paxillin在腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中起著十分重要的作用。
　　 反義寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides，ASODN)可特異性的抑制靶基因

3、的表達(dá)，而不影響其他基因的正常功能，近年來已廣泛用于基因研究，但在食管癌EC9706細(xì)胞中，利用ASODN抑制paxillin產(chǎn)生影響的研究，目前尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。
　　 本研究采用ASODN技術(shù)，觀察不同濃度的paxillin ASODN處理食管癌EC9706細(xì)胞不同時(shí)間后，對(duì)食管癌細(xì)胞paxillin的表達(dá)抑制情況。將paxillinASODN轉(zhuǎn)染的最佳作用時(shí)間和最佳作用濃度的EC9706細(xì)胞接種于裸小鼠皮下，構(gòu)建裸鼠移植瘤模

4、型，觀察各組裸鼠成瘤情況及構(gòu)建的裸鼠移植瘤組織中paxillin的表達(dá)情況，為食管癌的臨床靶向治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 材料和方法
　　 1.人食管癌EC9706細(xì)胞系由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所贈(zèng)送。
　　 2.EC9706細(xì)胞分組培養(yǎng)：將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的細(xì)胞按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分為不同終濃度、不同作用時(shí)間的ASODN實(shí)驗(yàn)組、無關(guān)序列組(N-ODN)和空白對(duì)照組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔進(jìn)行培養(yǎng)。
　　 3.利用Lip

5、ofecter脂質(zhì)體介導(dǎo)，轉(zhuǎn)染paxillin ASODN和N-ODN于食管癌EC9706細(xì)胞中。
　　 4.SPF級(jí)BALB/C裸小鼠15只，飼養(yǎng)在恒濕、恒溫的裸鼠隔離器中，飼料及飲水均經(jīng)滅菌處理。
　　 5.裸鼠移植瘤模型的構(gòu)建：將ASODN實(shí)驗(yàn)組、N-ODN組和空白對(duì)照組細(xì)胞分別注入裸鼠左下肢皮內(nèi)，在恒濕、恒溫的隔離器中飼養(yǎng)。
　　 6.采用免疫組化PV法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞和移植瘤組織中Paxillin蛋白的

6、表達(dá)。
　　 7.采用原位雜交技術(shù)檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞和移植瘤組織中paxillin mRNA的表達(dá)。
　　 8.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS10.0軟件。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±s)表示，兩組均數(shù)的比較用t檢驗(yàn)，兩組以上均數(shù)的比較用單因素方差分析；檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　 結(jié)果
　　 1.免疫細(xì)胞化學(xué)顯示，轉(zhuǎn)染paxillin ASODN的EC9706細(xì)胞隨濃度或時(shí)間的增加，Paxillin蛋白

7、的表達(dá)降低：在同一時(shí)間不同濃度和同一濃度不同時(shí)間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，濃度為12μmol/L paxillin ASODN作用72h效應(yīng)最強(qiáng)。
　　 2.原位雜交結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染paxillin ASODN的EC9706細(xì)胞隨濃度或時(shí)間的增加paxillin mRNA表達(dá)降低，在同一時(shí)間不同濃度和同一濃度不同時(shí)間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，濃度為12μmol/L paxillin ASODN作用72h效應(yīng)最強(qiáng)

8、。
　　 3.免疫組織化學(xué)顯示，實(shí)驗(yàn)組裸鼠移植瘤組織中Paxillin蛋白的表達(dá)降低，與無關(guān)序列組和空白對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 4.原位雜交結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組裸鼠移植瘤組織中paxillin mRNA的表達(dá)降低，分別與N-ODN組和空白對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論
　　 1.paxillin ASODN轉(zhuǎn)染后，EC9706細(xì)胞中Paxillin