甘草酸二銨對小鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、缺血性腦血管病是危害人類健康與生存的主要疾病之一，具有高發(fā)病率、高患病率、高死亡率、高致殘率、高復發(fā)率的特點。中醫(yī)學認為中風病是在氣血陰陽虧虛的基礎上，由虛（氣虛、陰虛）、火（心火、肝火）、風（外風、肝風）、痰（風痰、濕痰）、氣（氣滯、氣逆）、血（血虛、血瘀）等多種因素作用于人體，在一定條件下相互影響，相互作用，導致臟腑功能失調(diào)，氣血逆亂，上犯于腦而產(chǎn)生的。
　　 近年來研究表明腦缺血促發(fā)的炎性反應是導致腦缺血性損傷的重要因素。

2、腦缺血促發(fā)的炎癥反應是多途徑、多步驟、多因素相互作用的復雜網(wǎng)絡過程，其主要涉及炎性細胞的浸潤、各種細胞因子的表達、核轉(zhuǎn)錄因子(NF-κB)的活化等病理環(huán)節(jié)。體內(nèi)炎性代謝網(wǎng)絡存在復雜的動態(tài)調(diào)控機制，有多種致炎因子、細胞因子、環(huán)氧化酶、一氧化氮合酶(NOS)和NF-κB等通路參與調(diào)控。因此深入探討缺血性腦血管病的炎性途徑，明確其在腦缺血病變過程中的作用機制，具有十分重要的醫(yī)學價值。
　　 由于目前缺乏有效和廣泛適用性藥物治療缺血性中

3、風患者，因而越來越多的研究對傳統(tǒng)醫(yī)藥的興趣與日俱增。甘草性平味甘，為補氣類中藥，具有補中益氣、清熱解毒、潤肺止咳、緩急止痛、調(diào)和藥性之功效，其根部可做祛痰劑、利尿劑和清肺劑。甘草酸二銨是甘草酸的一種鹽形式。甘草酸是甘草中含量最高的皂苷類成分，是由一分子甘草次酸和兩分子葡萄糖醛酸組成。已得到證實具有抗炎、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫功能，保肝作用等多種藥理作用。研究表明，甘草酸可以抑制在小鼠肝損傷模型中的炎癥。然而，甘草酸二銨或者說是

4、甘草酸在腦缺血再灌注損傷的保護作用還沒有得到明確的證實。目的：探討甘草酸二銨在腦缺血再灌注損傷的保護作用及可能機制，為其用于治療缺血性腦損傷提供理論依據(jù)。
　　 方法:1）第一部分研究利用插線法制備局灶性大腦中動脈閉塞(MCAO)小鼠模型，甘草酸二銨組腹腔注射甘草酸二銨，MCAO組給予同量生理鹽水，假手術組（sham組）作為對照。于再灌注1天、3天、7天，利用神經(jīng)功能學評分法評價神經(jīng)功能缺損程度、干濕重法測定腦含水量和TTC染色

5、檢測腦梗死體積評價甘草酸二銨在腦缺血再灌注損傷的保護作用；用HE和Nissl染色評價甘草酸二銨對小鼠腦缺血再灌注損傷中腦組織病理形態(tài)的影響。2）利用RT-PCR檢測炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平的表達，以及COX-2和iNOSmRNA水平的表達；用免疫組化檢測IL-6、TNF-α、COX-2和GFAP陽性細胞數(shù)的表達；評價甘草酸二銨對小鼠腦缺血再灌注損傷中炎癥反應的抑制作用。3）用免疫組化檢測NF-κB陽性細胞數(shù)的

6、表達，利用Westernblot測定磷酸化的IκB（p-IκB）以及NF-κBP50、P65蛋白的激活情況，評價甘草酸二銨對小鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用與NF-κB信號通路的影響。
　　 結果:1）在第一部分實驗中，與MCAO組比較，甘草酸二銨干預能明顯改善小鼠腦缺血后的神經(jīng)功能缺損程度(P＜0.05)，減輕腦水腫(P＜0.05)及腦梗死體積(P＜0.05);HE染色中，完整可辨的神經(jīng)細胞數(shù)量明顯增多(P＜0.05)，變性壞死

7、組織范圍相對縮小、程度減輕。甘草酸二銨治療組小鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細胞尼氏體較MCAO組明顯增加(P＜0.05)。2)在第二部分實驗中，與MCAO組比較，甘草酸二銨治療組小鼠腦皮質(zhì)內(nèi)IL-1β、TNF-α、COX-2和iNOSmRNA水平的表達在再灌注1天和3天時明顯降低（P＜0.05）;在再灌注7天時，IL-1β、TNF-α和COX-2mRNA的表達水平明顯減少(P＜0.05)，iNOSmRNA水平的表達未見明顯降低(P＞0.05)。與MC

8、AO組相比，在再灌注1天和3天時，甘草酸二銨治療組中IL-6mRNA水平的表達顯著增加（P＜0.05），在再灌注7天時未見明顯變化(P＞0.05)。免疫組化結果顯示，與MCAO組比較，甘草酸二銨治療組小鼠腦皮質(zhì)內(nèi)COX-2和TNF-α陽性細胞數(shù)在再灌注1天和3天時明顯降低(P＜0.05)，在再灌注7天時，TNF-α陽性細胞數(shù)明顯減少（P＜0.05），而COX-2未見明顯變化(P＞0.05);在再灌注1天、3天和7天時，IL-6的陽性細胞

9、數(shù)是增加的（P＜0.05）。與MCAO組相比，甘草酸二銨治療組GFAP的陽性細胞數(shù)明顯減少(P＜0.05)。3)在第三部分實驗中，與MCAO組比較，在再灌注1天、3天和7天時，甘草酸二銨治療組小鼠腦皮質(zhì)內(nèi)NF-κB陽性細胞數(shù)明顯降低（P＜0.05），p-IκB以及NF-κBP50、P65蛋白水平的表達明顯減少，P＜0.05。
　　 結論:甘草酸二銨干預能減輕小鼠腦缺血再灌注損傷，發(fā)揮腦保護作用，其作用機制可能是通過下調(diào)NF-κB