OPN誘導小鼠BMSCs向表皮細胞分化促進創(chuàng)面愈合的研究.pdf

1、背景：
　　皮膚創(chuàng)面愈合是一個極其復雜的病理、生理過程，需要多種細胞、細胞因子共同參與并且涉及炎癥反應、血管生成、肉芽組織形成和組織重塑，其中皮膚損傷后皮膚表面的完整性需要表皮細胞再生以維持。骨髓間充質(zhì)干細胞在體外分離、培養(yǎng)后仍然保持了多向分化能力和自我更新能力，其中向表皮細胞分化已經(jīng)被廣大研究者應用于創(chuàng)面修復[1]。骨橋蛋白屬于細胞外基質(zhì)蛋白，過去的大量研究表明在參與創(chuàng)面修復的過程中，骨橋蛋白對炎癥細胞、內(nèi)皮細胞等各種細胞作用的

2、發(fā)揮都起著重要調(diào)控作用。既往研究發(fā)現(xiàn)，創(chuàng)面組織內(nèi)聚集的大量骨髓間充質(zhì)干細胞與創(chuàng)面局部高表達的骨橋蛋白存在密切的聯(lián)系。研究骨髓間充質(zhì)干細胞在分化為表皮細胞、促進創(chuàng)面愈合過程中骨橋蛋白發(fā)揮的重要作用，無疑對促進損傷皮膚結(jié)構(gòu)和功能的完全修復是十分必要的。
　　目的：
　　以骨橋蛋白基因敲除小鼠和野生型小鼠作為研究對象，探討骨橋蛋白在骨髓間充質(zhì)干細胞體內(nèi)、體外分化為表皮細胞過程中發(fā)揮的作用。
　　方法：
　　1.體外實驗

3、:實驗分兩個組，野生型組(WT)和骨橋蛋白基因敲除型組(KO)，分離培養(yǎng)野生型和基因敲除型新生鼠（鼠齡1天）的BMSCs，流式鑒定其純度后，取第3代分別在表皮轉(zhuǎn)化培養(yǎng)體系中孵育，通過鏡下觀察、流式細胞檢測、免疫熒光染色、Western Blot等方法，比較兩組表皮細胞標志物角質(zhì)形成蛋白14(CK14)表達水平的差異。
　　2.動物實驗:動物實驗分為4個組:野生型小鼠創(chuàng)周注射GFP-MSCs組，即WT/MSCs組，按相同的方法，其他

4、3個組分別為WT/PBS組，KO/MSCs組，KO/PBS組。每組均采用8只雄鼠，鼠齡在6～8周左右，體重20～25g;將分離培養(yǎng)的GFP-MSCs和PBS按以上的分組注射到創(chuàng)周。從術(shù)后第1天開始，連續(xù)7天創(chuàng)面拍照，計算每組的創(chuàng)面愈合率，并在小動物成像儀下觀察GFP-MSCs向創(chuàng)面遷移的情況;分別在術(shù)后第3、5、7天切取創(chuàng)面組織進行HE染色觀察創(chuàng)面生長變化，免疫熒光染色檢測GFP-MSCs向表皮細胞分化的情況。
　　結(jié)果：

5、　　1.分離培養(yǎng)的BMSCs純度超過90％，細胞形態(tài)呈梭形或成纖維細胞樣;
　　2.BMSCs體外誘導分化后免疫熒光染色結(jié)果顯示，誘導分化后WT和KO組的細胞均表達CK14，WT組的表達陽性率明顯高于KO組(P＜0.01);
　　3.BMSCs體外誘導分化后WB檢測CK14的表達量，WT組明顯高于KO組（P＜0.01）;
　　4.WT/MSCs組創(chuàng)緣注射的GFP-MSCs向創(chuàng)面中心遷移的速度較KO/MSCs組快，并且遷

6、移的數(shù)量也較KO/MSCs組多（P＜0.01）;
　　5.動物實驗:以WT/PBS組作為對照，KO/PBS組的創(chuàng)面愈合速度較對照組慢(P＜0.05)，同樣以WT/PBS組作為對照，WT/MSCs組的創(chuàng)面愈合速度較對照組快(P＜0.05);
　　6.創(chuàng)周注射的GFP-MSCs可以分化為表皮細胞，其分化能力KO/MSCs組明顯弱于WT/MSCs組(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.骨橋蛋白能夠增強骨髓間充質(zhì)干細胞