RNAi誘導(dǎo)小鼠ES細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的研究.pdf

1、～；9053ZI／分類號(hào)墅望墨』單位代碼：10159學(xué)號(hào)：200321022中回鏊升夫拳碩士學(xué)位論文題目：RNAi誘導(dǎo)小鼠ES細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的研究InductionofmOUSeembryonicstemcellstoDeuron—IikecellswithRNAi研究生：主盔墾導(dǎo)師：廛重主學(xué)科專業(yè)：壘蔓生塹塋論文課題起止時(shí)間：—2004g—sB2005#lo，E1_論文完成時(shí)間：!堂圭!旦()垂匿)RNAi誘導(dǎo)小鼠Es細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)

2、胞分化的研究刖吾RNAi技術(shù)是近年來(lái)新興的、十分有效的干擾細(xì)胞基因表達(dá)的手段，它能阻滯哺乳動(dòng)物特異性基因的表達(dá)，成劑量依賴性，而且其操作簡(jiǎn)單、時(shí)間短，因此比傳統(tǒng)方法(反義核苷酸技術(shù)、基因敲除等)能更快更方便地使基因表達(dá)沉默或基因表達(dá)降低，從而為干細(xì)胞相關(guān)基因功能的研究提供了更有效的工具。胚胎于細(xì)胞(embryonicstemceils，ESCs)來(lái)源于著床前胚胎的囊胚期內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(innercellmass，ICM)，具有發(fā)育全能性。神經(jīng)

3、細(xì)胞被認(rèn)為是終末分化細(xì)胞，其損傷后很難再由自體的神經(jīng)干細(xì)胞補(bǔ)充。研究ESCs向神經(jīng)細(xì)胞分化不僅可以應(yīng)用于I臨床，為神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如帕金森癥、癲癇、腦卒中等患者進(jìn)行細(xì)胞移植，使其盡快康復(fù)；還可以作為研究哺乳動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的體外模型，了解神經(jīng)分化過(guò)程中基因表達(dá)調(diào)控的變化，并方便進(jìn)行增減基因操作。直接移植ESCs會(huì)有致瘤性，因此體外誘導(dǎo)ESCs向神經(jīng)細(xì)胞分化的純度、比例是解決細(xì)胞移植治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病臨床應(yīng)用的關(guān)鍵點(diǎn)。ESCs體外分化很難控制

4、，細(xì)胞的特化過(guò)程還不清楚，分化步驟也是經(jīng)驗(yàn)性的，產(chǎn)生的結(jié)果多變、細(xì)胞混雜。目前常用誘導(dǎo)方法包括使用特異性誘導(dǎo)劑，“五步誘導(dǎo)法”，還有尚有爭(zhēng)議的基質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)法，以及基因轉(zhuǎn)染與篩選，但有操作復(fù)雜、費(fèi)用高、毒性大等缺點(diǎn)。本課題組在先前的研究中，通過(guò)“序貫誘導(dǎo)法”誘導(dǎo)小鼠ESCs分化為神經(jīng)細(xì)胞，并進(jìn)行了基因芯片分析。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)基因芯片分析，篩選神經(jīng)細(xì)胞分化主導(dǎo)調(diào)控基因，利用RNAi技術(shù)對(duì)其分化機(jī)制進(jìn)行初步的探討，探索出一種直接在分子水平上簡(jiǎn)便