骨橋蛋白BALB-c哮喘小鼠肺組織中表達(dá)及地塞米松的干預(yù)作用.pdf

1、目的：
　　建立OVA致敏和激發(fā)的哮喘小鼠模型;探討不同程度的哮喘氣道炎癥與骨橋蛋白(OPN)的表達(dá)的相關(guān)性;探討地塞米松(DXM)干預(yù)后哮喘小鼠肺組織中OPN的表達(dá)情況。
　　方法：
　　4～6周齡、SPF級(jí)雌性BALB/c小鼠50只，隨機(jī)分為正常組、不同程度哮喘組（卵清蛋白OVA激發(fā)1周組、OVA激發(fā)2周組）及相應(yīng)的DXM組（DXM治療1周組、DXM治療2周組），每組10只;OVA致敏、激發(fā)建立急性哮喘模型，正常對(duì)

2、照組致敏激發(fā)均用等體積的緩沖液(PBS)替代OVA;每只小鼠于取材前腹腔注射10％水合氯醛0.1 mL麻醉，最后一次激發(fā)后24小時(shí)內(nèi)斷頸處死小鼠，行左心取血，低溫離心后取上清，用于ELISA分析。取新鮮雙肺組織，將左肺以10倍體積的4％多聚甲醛溶液固定，常規(guī)方法石蠟包埋、切片，行HE染色及免疫組織化學(xué)檢測。按肺葉結(jié)構(gòu)解剖右肺，分裝后液氮凍存用于western blot法及Real-time PCR法分析。HE染色觀察各組小鼠氣道炎癥情況

3、;ELISA法檢測血清OVA-sIgE水平;免疫組化和Western blot法分別定位和定量分析肺組織OPN表達(dá);Real-time PCR檢測肺組織OPN mRNA水平。
　　結(jié)果：
　　1、肺組織病理改變
　　HE染色可見正常組小鼠支氣管管壁完整光滑，上皮細(xì)胞排列整齊，管腔無狹窄，支氣管及周圍血管組織無明顯炎性細(xì)胞浸潤。哮喘組小鼠支氣管管壁完整性受損，上皮細(xì)胞排列紊亂、脫落，管腔明顯縮窄;支氣管及周圍血管組織可見

4、大量的炎性細(xì)胞浸潤;并且在哮喘組中，OVA激發(fā)2周組上述病理學(xué)改變較OVA激發(fā)1周組重。
　　2、血清OVA-sIgE水平
　　ELISA結(jié)果顯示，哮喘組小鼠血清OVA-sIgE明顯高于正常組(P＜0.01);哮喘組中，激發(fā)2周組血清OVA-sIgE水平較激發(fā)1周組明顯升高(P＜0.01);DXM組血清OVA-sIgE水平低于哮喘組且高于正常組(P＜0.01);DXM組中，治療2周組與治療1周組差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.

5、549)。
　　3、OPN在肺組織中的定位表達(dá)
　　免疫組化法結(jié)果顯示，OPN在肺組織表達(dá)主要定位于支氣管上皮及氣道和血管周圍浸潤的炎癥細(xì)胞;經(jīng)圖像分析，哮喘組肺組織OPN表達(dá)（OVA-1周組:44.8±3.5;OVA-2周組:66.3±4.9）高于正常組（11.5±2.8）;其中，OVA激發(fā)2周組表達(dá)高于激發(fā)1周組;DXM組OPN表達(dá)（DXM-1周組:29.2±3.7:DXM-2周組:28.5±3.3）低于哮喘組;上述各組

6、之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　4、Western blot分析肺組織OPN的表達(dá)
　　Western blot結(jié)果顯示，哮喘組小鼠肺組織OPN表達(dá)明顯高于正常組(P＜0.01);哮喘組中，激發(fā)2周組OPN水平較激發(fā)1周組明顯升高(P＜0.01);DXM組OPN水平低于哮喘組卻高于正常組(P＜0.01);DXM組中，治療2周組與治療1周組差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.925)。，
　　5、Real-tim

7、e PCR檢測肺組織OPN mRNA的相對(duì)表達(dá)量
　　Real-time PCR結(jié)果顯示，哮喘組小鼠肺組織OPN mRNA相對(duì)表達(dá)明顯高于正常組(P＜0.01);哮喘組中，激發(fā)2周組OPN mRNA水平較激發(fā)1周組明顯升高(P＜0.01);DXM組OPN mRNA水平低于哮喘組卻高于正常組(P＜0.01);DXM組中，治療2周組與治療1周組差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.928)。
　　結(jié)論：
　　OPN可能是哮喘發(fā)病機(jī)