姜黃素對哮喘大鼠肺組織骨橋蛋白表達的影響及其機制探討.pdf

1、目的：
　　1.研究骨橋蛋白(Osteopontin，OPN)在哮喘大鼠中的動態(tài)變化及其在支氣管哮喘（簡稱哮喘）氣道重塑中的作用。
　　2.探討姜黃素對哮喘大鼠肺組織OPN表達的調(diào)節(jié)作用及其在哮喘氣道重塑中的作用。
　　3.探究姜黃素是否通過TGF-β1/Smad通路調(diào)節(jié)OPN的表達。
　　4.研究布地奈德對哮喘大鼠肺組織OPN表達的調(diào)節(jié)作用及其機制，并對比觀察姜黃素、布地奈德單用與二者聯(lián)合用藥對哮喘大鼠肺組織O

2、PN表達的影響。
　　方法：
　　SPF(specific pathogen free)級雄性幼年SD(Sprague-Dawlay)大鼠120只，4～6周，100～120克，運用卵白蛋白(ovalbumin，OVA)致敏與激發(fā)的方法，建立哮喘大鼠氣道重塑模型。實驗隨機分為對照組（N組）、哮喘組（A組）、布地奈德組（B組）、姜黃素組（C組）、姜黃素、布地奈德聯(lián)合用藥組（M組），每組根據(jù)激發(fā)時間為3小組。N組根據(jù)激發(fā)時間分為分

3、為2周組、4周組、8周組（即N2組、N4組、N8組）;A組根據(jù)激發(fā)時間分為2周組、4周組、8周組（即A2組、A4組、A8組）;B組根據(jù)激發(fā)時間分為2周組、4周組、8周組（即B2組、B4組、B8組）;C組根據(jù)激發(fā)時間分為2周組、4周組、8周組（即C2組、C4組、C8組）;M組根據(jù)激發(fā)時間分為2周組、4周組、8周組（即M2組、M4組、M8組），共15小組，每個小組各8只大鼠，分別在末次激發(fā)后1～2h處死，留取標本備測。運用光鏡觀察大鼠肺組織

4、病理變化;圖像分析技術(shù)測定肺內(nèi)支氣管壁厚度(airway wall thickness，Wat)和支氣管平滑肌厚度(airway smooth muscle thickness，Wam);逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)法測定肺組織勻漿中OPN和Samd2的mRNA表達;免疫組化(immuno-histochemistry，IHC)檢測肺組

5、織OPN和Smad2蛋白含量的平均吸光度(mean optical density，MOD)。
　　結(jié)果：
　　1.光鏡
　　對照組支氣管和血管周圍未見炎性細胞浸潤，支氣管平滑肌未出現(xiàn)增厚。哮喘組可見支氣管和血管周圍炎性細胞浸潤，以淋巴細胞、嗜酸性粒細胞、中性粒細胞為主;A4、A8組可見管腔內(nèi)粘液栓，基底膜增厚，支氣管壁增厚，膠原沉積等。各干預(yù)組炎性細胞浸潤明顯減少，其它病理改變較哮喘組減輕。
　　2.支氣管壁厚

6、度和支氣管平滑肌厚度
　　2.1支氣管壁厚度的比較(μm2/μm)
　　各時期A組，即A2組(49.11±1.70)、A4組(56.69±0.95)、A8組(64±0.89)均顯著高于N2組、N4組、N8組(分別為:29.71±1.56，29.99±1.09，30.68±1.03)（P均＜0.01）。A8組與A4組相比、A4組與A2組相比均顯著增厚（P均＜0.01）。B2組(37.84±1.16)、C2組(38.41±1.3

7、2)、M2組(36.65±1.06)均顯著低于A2組(P均＜0.01); N2組顯著低于B2組、C2組、M2組(P均＜0.01); M2組低于B2組、C2組(P均＜0.05)，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義;B4組(47.81±1.41)、C4組(46.32±0.74)、M4組(43.96±1.01)顯著低于A4組(P均＜0.01); N4組顯著低于B4組、C4組、M4組(P均＜0.01);M4組顯著低于B4組、C4組（P均＜0.01）。B8組(5

8、1.15±1.77)、C8組(50.92±1.47)、M8組(49.01±1.21)均顯著低于A8組(P均＜0.01);N8組顯著低于B8組、C8組、M8組(P均＜0.01); M8組低于B8組、C8組（P均＜0.05），存在統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2.2支氣管平滑肌厚度的比較(μm2/μm)
　　A2組、A4組、A8組(分別為18.46±0.62、22.27±0.65、26.83±0.87)均顯著高于同時期N2組、N4組、N8組

9、(分別為:12.46±1.01，12.65±0.82，13.04±0.73)(P均＜0.01)。A8組、A4組均較A2組顯著增厚（P均＜0.01），A8組較A4組呈增厚(P＜0.01)。B2組(15.05±1.21)、C2組(14.69±0.75)、M2組(13.57±1.01)均顯著低于A2組;N2組顯著低于B2組、C2組(P均＜0.01); N2組低于M2組(P＜0.05)，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義;M2組低于B2組、C2組（P均＜0.0

10、5），差別具有統(tǒng)計學(xué)意義;B4組(17.12±1.21)、C4組(18.03±1.38)、M4組(16.03±0.75)均顯著低于A4組（P均＜0.01）;N4組顯著低于B4組、C4組、M4組（P均＜0.01）;M4組低于B4組、C4組（P均＜0.05），存在統(tǒng)計學(xué)意義; B8組(20.18±1.10)、C8組(20.70±0.92)、M8組(18.88±1.51)顯著低于A8組(P均＜0.01); N8組顯著低于B8、C8、M8組(P

11、均＜0.01); M8低于C8組(P均0.05)，存在統(tǒng)計學(xué)差異差異。
　　3.IHC檢測肺組織中OPN、Samd2蛋白表達
　　3.1肺組織OPN平均吸光度(MOD)比較
　　各時期A組，即A2組(0.33±0.11)、A4組(0.46±0.08)、A8組(0.70±0.06)均顯著高于N2組、N4組、N8組（分別為:0.14±0.02，0.14±0.01，0.15±0.01）(P均＜0.01)。A8組與A4組相比、

12、A4組與A2組相比均顯著增厚（P均＜0.01）。B2組(0.22±0.01)、C2組(0.23±0.02)、M2組(0.19±0.02)低于A2組;N2組顯著低于B2組、C2組、M2組(P均＜0.01); M2組顯著低于B2組、C2組（P均＜0.01）。B4組(0.38±0.11)、C4組(0.36±0.06)、M4組(0.30±0.03)顯著低于A4組(P均＜0.01); N4阻顯著低于B4組、C4組、M4組（P均＜0.01）;M4組

13、顯著低于B4組(P＜0.01)，M4組低于C4組(P＜0.05);B8組(0.53±0.05)、C8組(0.54±0.05)、M8組(0.48±0.04)低于A8組（P均＜0.01）;N8組顯著低于B8組、C8組、M8組(P均＜0.01); M8組低于B8組、C8組（P均＜0.05），差別具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.2肺組織Samd2蛋白平均吸光度(MOD)比較
　　A2組、A4組、A8組(分別為0.39±0.05、0.50±

14、0.04、0.66±0.06)均高于N2組、N4組、N8組(分別為:0.23±0.03，0.24±0.03，0.25±0.03)（P均＜0.01）。A8組、A4組均較A2組顯著增厚，A8組較A4組呈增厚(P＜0.01)。B2組(0.31±0.03)、C2組(0.32±0.04)、M2組(0.28±0.04)均顯著低于A2組(P均＜0.01); N2顯著低于B2組、C2組、M2組（P均＜0.01）。M2組低于B2組(P＜0.05)，差別具

15、有統(tǒng)計學(xué)意義;M2組顯著低于與C2組(P＜0.01)。B4組(0.39±0.05)、C4組(0.38±0.04)、M4組(0.32±0.04)顯著低于A4組(P均＜0.01); N4組顯著低于B4組、C4組、M4組（P均＜0.01）。M4組低于B4組、C4組（P均＜0.05），均存在統(tǒng)計學(xué)意義。B8組(0.54±0.08)、C8組(0.51±0.06)、M8組(0.44±0.04)低于A8組(P均＜0.01); N8組顯著低于B8、C8

16、、M8組（P均＜0.01）;M8組顯著低于B8組及C8組（P均＜0.01）。
　　4.RT-PCR法測肺組織勻漿中OPN mRNA、Samd2mRNA表達
　　4.1肺組織勻漿中OPN mRNA表達
　　各時期A組，即A2組(0.57±0.01)、A4組(0.99±0.16)、A8組(1.25±0.16)均顯著高于同時期N2組、N4組、N8組(分別為:0.38±0.04，0.42±0.06，0.50±0.07)（P均＜

17、0.01）。A8組、A4組均較A2組顯著增厚（P均＜0.01），A8組較A4組呈增厚(P＜0.01)。B2組(0.49±0.03)、C2組(0.51±0.06)、M2組(0.44±0.06)顯著低于A2組(P均＜0.01); N2組顯著低于B2組、C2組（P均＜0.01），N2組低于M2組(P＜0.05)，差別有統(tǒng)計學(xué)意義;M2組低于B2組、C2組（P均＜0.05），差別具有統(tǒng)計學(xué)意義。B4組(0.71±0.07)、C4組(0.72±0

18、.06)、M4組(0.63±0.09)顯著低于A4組(P均＜0.01); N4顯著低于B4組、C4組、M4組（P均＜0.01）; M4組低于B4組、C4組(P＜0.05)，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義。B8組(0.91±0.10)、C8組(0.90±0.11)、M8組(0.85±0.07)低于A8組;N8顯著低于M8組、B8組、C8組(P均＜0.01); M8組低于B8組、C8組（P均＜0.05），差別具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4.2肺組織勻漿

19、中Samd2mRNA表達
　　各時期A組，即A2組(0.80±0.05)、A4組(1.01±0.10)、A8組(1.43±0.07)均高于N2組、N4組、N8組(分別為:0.38±0.03，0.38±0.03，0.40±0.03)（P均＜0.01）。A8組、A4組均較A2組顯著增厚（P均＜0.01），A8組較A4組呈增厚(P＜0.01)。B2組(0.65±0.05)、C2組(0.64±0.07)、M2組(0.57±0.05)均顯著

20、低于A2組（P均＜0.01）;N2顯著低于B2組、C2組、N2組(P均＜0.01); M2組顯著低于B2組(P＜0.01); M2組低于與C2組(P＜0.05)，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義。B4組(0.72±0.10)、C4組(0.74±0.06)、M4組(0.62±0.05)顯著低于A4組(P均＜0.01); N4組顯著低于B4組、C4組、M4組(P均＜0.01）;M4組低于B4組、C4組（P均＜0.05），均存在統(tǒng)計學(xué)意義。B8組(0.98

21、±0.11)、C8組(1.04±0.12)、M8組(0.88±0.03)顯著低于A8組（P均＜0.01）;N8組顯著低于B8、C8、M8組（P均＜0.01）;M8組顯著低于B8組(P均＜0.01); M8組低于C8組(P＜0.05)，存在統(tǒng)計學(xué)意義。
　　5.相關(guān)分析
　　(1)大鼠肺組織OPN與Samd2含量的平均光密度、OPN mRNA與Samd2 mRNA含量呈顯著正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)分別為:r=0.8855，r=0.85

22、77，P均＜0.01，N=120)。
　　(2)大鼠肺組織OPNmRNA表達與Wat呈顯著正相關(guān)(r=0.8781，N=120)，大鼠肺組織OPN蛋白的表達與Wat呈顯著正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)為r=0.9027，N=120)。
　　(3)大鼠肺組織OPNmRNA表達與Wam呈顯著正相關(guān)(r=0.8904，N=120)，大鼠肺組織OPN蛋白的表達與Wam呈顯著正相關(guān)（相關(guān)系數(shù)為:r=0.8984，P均＜0.01，N=120）。