Smad3通過抑制AKT磷酸化增加肝癌細(xì)胞對順鉑的化療敏感性.pdf

1、第一部分 smad3增加了肝癌對順鉑的化療敏感性
　　目的：研究smad3在肝癌對順鉑化療敏感性中的作用
　　方法：建立過表達(dá)和低表達(dá) smad3的肝癌細(xì)胞，利用 CCK-8、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)、小鼠皮下移植瘤模型和免疫組化從體內(nèi)和體外兩個(gè)方面檢測肝癌細(xì)胞對順鉑的化療敏感性，利用western blot檢測肝癌細(xì)胞smad3下游靶基因的變化。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建了過表達(dá)smad3的肝癌細(xì)胞7721-smad

2、3和低表達(dá)smad3的肝癌細(xì)胞LM3-shsmad3;高表達(dá)smad3的肝癌細(xì)胞系對順鉑的化療敏感性增加；順鉑抑制高表達(dá)smad3肝癌細(xì)胞皮下移植瘤的生長；高表達(dá) smad3的肝癌細(xì)胞在順鉑的作用下上調(diào)p21Cip1和下調(diào)c-myc，cyclinD1, bcl2的表達(dá)。
　　結(jié)論：smad3通過上調(diào)p21Cip1和下調(diào)c-myc, bcl2, cyclinD1來增加肝癌細(xì)胞對順鉑的化療敏感性。這一發(fā)現(xiàn)為肝癌的生物學(xué)分層和肝癌的個(gè)體

3、化治療提供了新的理論依據(jù)。
　　第二部分 LY294002恢復(fù)smad3缺失的肝癌細(xì)胞對順鉑的化療敏感性
　　目的：研究非smad通路在smad3增加肝癌化療敏感性中的作用
　　方法：利用TGFβ1和各種小分子抑制劑檢測smad3與非smad通路之間的關(guān)系；利用western blot檢測順鉑處理肝癌細(xì)胞后非smad通路的變化；用順鉑和PI3K/AKT抑制劑處理SMMC-7721和HCC-LM3細(xì)胞后，利用CCK8，平

4、板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖能力，利用western檢測smad3下游轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，評價(jià)LY294002在低表達(dá)smad3誘導(dǎo)的順鉑耐藥中的作用。
　　結(jié)果：過表達(dá)smad3增加了ERK,JNK,p38的磷酸化水平，降低了AKT的磷酸化水平；smad3低表達(dá)通過誘導(dǎo)AKT磷酸化增加肝癌對順鉑的耐藥；LY294002顯著增加smad3低表達(dá)細(xì)胞中順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，這一作用在 smad3高表達(dá)細(xì)胞中并不明顯；LY294002和順鉑發(fā)