二甲雙胍抑制前列腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲并增加對(duì)紫杉醇敏感性的研究.pdf

1、背景:
　　前列腺癌(Prostate cancer, PCa)在歐美許多國(guó)家是男性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，占男性癌癥死因的第二位。前列腺癌的發(fā)病率在全球分布不平衡，我們國(guó)家的發(fā)病率雖然低于西方國(guó)家，但是近年來(lái)，隨著人口老齡化和生活條件的改善，發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。從微觀上講，和大多數(shù)腫瘤一樣，前列腺癌發(fā)病的病因非常復(fù)雜，是一個(gè)涉及多基因的過(guò)程。其中，染色體畸變起主導(dǎo)作用，原癌基因的激活與抑癌基因的失活也起到重要作用。從宏觀上講，前列

2、腺癌的發(fā)病受到年齡、種族和家庭遺傳的影響，同時(shí)也與激素、營(yíng)養(yǎng)有關(guān)。在前列腺癌的治療方面，由于前列腺癌的生長(zhǎng)發(fā)展都具有雄性激素依賴(lài)性，所以在早期都采用雄激素阻斷療法（androgen deprivation therapy, ADT），且治療效果不錯(cuò)，但是經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的雄激素剝奪療法后，幾乎所有的前列腺癌都轉(zhuǎn)化成雄性激素非依賴(lài)的前列腺癌(androgen-independent prostate cancer, AIPC)，導(dǎo)致治療困難，

3、以及治療效果欠佳，患者預(yù)后不良。根治性前列腺切除術(shù)與局部照射對(duì)前列腺癌早期患者是兩種有效的治療方法，如果輔助以?xún)?nèi)分泌治療則有益于提高療效和存活率。
　　二甲雙胍是一種Ⅱ型糖尿病患者口服的一線類(lèi)降糖藥物。二甲雙胍降低血糖的機(jī)制可總結(jié)為:通過(guò)降低肝葡萄糖的產(chǎn)生來(lái)降低血糖水平;通過(guò)增加骨骼肌對(duì)葡萄糖的攝取和利用降血糖;以及通過(guò)降低外周組織對(duì)胰島素的抵抗和抑制肝糖異生。其最常見(jiàn)的副作用是胃腸道反應(yīng)，最嚴(yán)重的毒副作用是乳酸性酸中毒。二甲雙胍

4、具有廉價(jià)、安全、不良反應(yīng)少、以及患者耐受性好等特性。自從2005年Evans等首次研究發(fā)現(xiàn)二甲雙胍能降低糖尿病患者的腫瘤發(fā)生率后，近年來(lái)，二甲雙胍已經(jīng)作為潛在的抗癌藥物成為研究的熱點(diǎn)。目前，大量文獻(xiàn)報(bào)道均證實(shí)，二甲雙胍在多種不同類(lèi)型的腫瘤中有抗癌作用，其中包括前列腺癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、食管癌、鼻咽癌、結(jié)腸癌和惡性黑色素瘤等。在前列腺癌中，有研究顯示二甲雙胍可抑制前列腺癌細(xì)胞系的增殖，誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡和阻滯細(xì)胞周期在特定的時(shí)期及其作用的

5、機(jī)制。還有部分研究表明，二甲雙胍與脂聯(lián)素、2DG（2-Deoxyglucose，脫氧葡萄糖）和比卡魯胺的協(xié)同抗腫瘤作用。但是到目前為止，二甲雙胍對(duì)前列腺癌細(xì)胞的遷移、侵襲，以及與EMT(Epithelial mesenchymal transform，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化)和對(duì)化療藥物紫杉醇的增效作用尚不清楚。
　　目的:
　　本課題應(yīng)用體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停芯慷纂p胍對(duì)前列腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力的影響，以及對(duì)前列腺癌細(xì)胞化療敏感

6、性的影響，以期為前列腺癌的臨床治療提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1、應(yīng)用MTS的方法檢測(cè)二甲雙胍，以及二甲雙胍和紫杉醇聯(lián)合用藥對(duì)前列腺癌細(xì)胞增殖作用的影響。
　　2、應(yīng)用劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell侵襲小室檢測(cè)二甲雙胍對(duì)前列腺癌細(xì)胞系遷移和侵襲能力的影響。
　　3、應(yīng)用Western blot的方法在前列腺癌中檢測(cè)二甲雙胍對(duì)EMT相關(guān)標(biāo)志性maker的影響。
　　4、應(yīng)用Western blot的方法

7、在前列腺癌中檢測(cè)二甲雙胍抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和遷移，以及增加紫杉醇敏感性的相關(guān)的信號(hào)通路。
　　結(jié)果:
　　MTS的結(jié)果顯示二甲雙胍抑制前列腺癌親本細(xì)胞及其耐藥細(xì)胞的增殖，并呈時(shí)間及濃度依賴(lài)關(guān)系。二甲雙胍與紫杉醇聯(lián)合用藥的MTS結(jié)果表明除了PC3細(xì)胞之外，紫杉醇組與紫杉醇聯(lián)合二甲雙胍組相比，紫杉醇聯(lián)合二甲雙胍組的細(xì)胞增殖抑制作用更明顯，提示二甲雙胍可能能夠提高細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性。劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，加

8、藥組細(xì)胞在15小時(shí)和24小時(shí)平均遷移距離明顯減少(P＜0.05)，在相應(yīng)的時(shí)間段后DU145，DU145-TxR，PC3，PC3-TxR的侵襲細(xì)胞的數(shù)量明顯減少(P＜0.05)。Western blot的方法檢測(cè)結(jié)果顯示二甲雙胍逆轉(zhuǎn)前列腺癌的上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化而影響其生物學(xué)功能。信號(hào)通路蛋白檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍處理后，DU145，PC3細(xì)胞的P-AMPK的表達(dá)增加，AMPK總蛋白水平不變，而DU145-TxR和PC3-TxR的P-AMPK和A