兩種重要食源性致病菌O血清型分子分型系統(tǒng)的建立、兩株不同宿主來(lái)源的大腸桿菌比較基因組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究.pdf

1、第一部分
　　食源性致病菌嚴(yán)重危害著食品安全和人類健康，沙門氏菌和副溶血弧菌是兩種常見的食源性致病菌。副溶血弧菌廣泛分布在世界各地的河口、沿海岸和海洋，是海產(chǎn)品引發(fā)食源性疾病最重要的因素。沙門氏菌存在于多種食物中，包括肉、蛋類、奶制品、蔬菜等，可以通過(guò)這些食物進(jìn)入人體，引起傷寒發(fā)熱、沙門氏菌病等疾病爆發(fā)。致病菌感染與細(xì)菌血清型有著重要的關(guān)系，對(duì)致病菌血清型的鑒定對(duì)疾病評(píng)估、感染的控制和流行病學(xué)調(diào)查有著重要意義。
　　本研究完

2、成了副溶血弧菌O血清型決定簇基因序列的破譯，篩選出副溶血弧菌所有13種O血清型的特異基因，建立了副溶血弧菌O血清型分型的多重PCR分子分型方法。這一方法經(jīng)41株副溶血弧菌、21株其它種屬細(xì)菌驗(yàn)證，具有很好的特異性。對(duì)從上海地區(qū)海產(chǎn)品中分離到的105份環(huán)境樣品進(jìn)行雙盲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，均得到正確的結(jié)果。靈敏度實(shí)驗(yàn)表明，該檢測(cè)方法可以檢測(cè)出1 ng的基因組DNA，未經(jīng)富集培養(yǎng)的細(xì)菌可以在104 CFU/ml的水平被檢測(cè)到，1 CFU/ml的細(xì)菌經(jīng)過(guò)

3、富集培養(yǎng)也完全可以得到正確鑒定。每克牡蠣制備的模擬實(shí)際樣品中含有2到8個(gè)CFU的細(xì)菌初始量即可通過(guò)PCR體系檢測(cè)到。
　　另外建立了針對(duì)沙門氏菌所有46種O血清型的基因芯片檢測(cè)方法，可以成功區(qū)分除了相似度特別高的6種血清型（沙門氏菌O67和B，沙門氏菌E1和E4，沙門氏菌A和D1）外的所有40種O血清型。該芯片方法經(jīng)293株沙門氏菌、186株大腸桿菌和志賀氏菌以及10株其它種屬細(xì)菌驗(yàn)證，具有很好的特異性。靈敏度實(shí)驗(yàn)表明在50 ng

4、的基因組水平該芯片可以得到穩(wěn)定有效的檢測(cè)結(jié)果。模擬西紅柿樣品實(shí)驗(yàn)表明，每克樣品中2到8個(gè)CFU的細(xì)菌即可被芯片方法鑒定。因此我們建立的兩種食源性致病菌分子檢測(cè)方法可以取代傳統(tǒng)的血清型方法，應(yīng)用到臨床和環(huán)境樣品檢測(cè)中去。
　　第二部分
　　細(xì)菌在適應(yīng)宿主環(huán)境的過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的突變，以此來(lái)更好地適應(yīng)環(huán)境。系統(tǒng)地研究致病菌的基因表達(dá)和進(jìn)化差異，對(duì)了解細(xì)菌適應(yīng)宿主的機(jī)制和致病機(jī)制有著重要作用。
　　研究了兩株不同來(lái)源的大腸桿

5、菌O156∶H25菌株P(guān)T199和CB647，它們分別分離自羊和牛，而且只有CB647菌株會(huì)對(duì)人致病。它們對(duì)人結(jié)腸癌上皮細(xì)胞HT-29的吸附能力有明顯差別。完成了PT199和CB647的全基因組測(cè)序，還有另外10株分離自病人、牛、羊和肉不同來(lái)源的大腸桿菌O156∶H25菌株，通過(guò)比較基因組學(xué)分析揭示了它們的遺傳差異和變化。同時(shí)研究了PT199和CB647菌株在與HT-29細(xì)胞吸附前后的基因表達(dá)變化和差異。通過(guò)對(duì)遺傳差異和基因表達(dá)差異的綜