MEPE-OF45,SERPINB2及RB相關(guān)性研究.pdf

1、細胞外基質(zhì)磷酸糖蛋白/成骨細胞/骨細胞因子45(Matrix ExtracellularPhosphoglycoprotEin/Osteoblast/Osteocyte Factor45，MEPE/OF45)自2000年被首次克隆以來，作為小型的N—端連接整合素的糖蛋白(Small Integrin—BindingLigand，N—linked Glycoprotein，SIBLING)家族的一員，它的功能研究就一直局限在調(diào)節(jié)骨代謝和磷

2、(體內(nèi))平衡方面。
　　 近年來，本實驗室及其國外合作實驗室的前期研究揭示了MEPE/OF45蛋白的新功能，即MEPE/OF45參與細胞DNA損傷應答；MEPE/OF45能夠增強細胞對DNA損傷誘導劑(DNA Damage Inducers)的耐受性。本實驗室在用基因表達譜芯片研究MEPE/OF45功能過程中還發(fā)現(xiàn)MEPE/OF45能夠抑制細胞凋亡，并且MEPE/OF45的高表達伴隨著SERPlNB2[Serine(or cys

3、teine)proteinase inhibitor，clade type—2]及SERPINB2相關(guān)蛋白RB(retinoblastoma)的高表達。因此，研究三者之間可能的調(diào)控關(guān)系對揭示MEPE/OF45的抗輻射及抗凋亡功能具有重要意義。
　　 在本研究中我們獲得了以下的結(jié)果：(1)原核表達了SerpinB2基因、純化了SERPINB2和MEPE/OF45的融合蛋白，并用純化的蛋白免疫小鼠制備了抗SERPINB2和抗MEPE

4、/OF45的多克隆抗體，用ELISA測定抗體的效價可達1：20000，Western印跡表明抗體的特異性較好；(2)構(gòu)建了SerpinB2—siRNA載體，篩選得到2條SerpinB2—siRNA，可對293T細胞內(nèi)源性SERPINB2的表達有抑制作用：(3)用瞬時轉(zhuǎn)染過表達MEPE/OF45、microRNA抑制MEPE/OF45的表達及siRNA敲低SERPINB2的表達，研究了MEPE/OF45與SERPINB2和RB在蛋白水平的