冠突散囊菌產(chǎn)胞外多糖的研究.pdf

1、冠突散囊菌(Eurotium cristatum,EC)是茯磚茶生產(chǎn)過程中的優(yōu)勢菌，是形成茯磚茶獨(dú)特品質(zhì)的主要因素。本研究利用茯磚茶中分離純化出來的冠突散囊菌進(jìn)行深層液體發(fā)酵，提取不同培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)生的胞外多糖，對提取條件進(jìn)行了正交試驗(yàn)，確定了最佳提取工藝；采用DEAE-52纖維柱色譜和Sephadex G-100 葡聚糖凝膠柱色譜對提取出的冠突散囊菌粗多糖進(jìn)行了分離純化，繪制出了分離曲線：并對純化出的多糖進(jìn)行了分子量、單糖組成等的測定及

2、結(jié)構(gòu)分析。其主要結(jié)果如下： 1.冠突散囊菌胞外多糖提取工藝的研究通過正交試驗(yàn)確定了冠突散囊菌胞外多糖的最佳提取條件：冠突散囊菌液體發(fā)酵液濃縮至原體積的 1/4，乙醇濃度95％，乙醇沉淀時(shí)間10h。分別得到兩種多糖 ECP 和 ECP<'＃>，其提取量分別為 195.21μg/mL和136.81μg/mL，其粗多糖中總糖含量分別為62.2％和70.1％。 2.冠突散囊菌胞外多糖的分離、純化與性質(zhì)研究冠突散囊菌液體深層發(fā)酵濾

3、液經(jīng)濃縮，醇析，透析凍干得多糖粗品。采用DEAE-52 纖維柱色譜和Sephadex G-100 葡聚糖凝膠柱色譜對粗多糖ECP和ECP<'＃>進(jìn)行分離純化研究。結(jié)果表明： 在弱陰離子 DEAE-52 交換柱上，經(jīng)分步洗脫，粗多糖ECP和ECP<'＃>分離后分別得到 4 個(gè)部分，其中，1.0MNaCl 洗脫部位含量最多，分別達(dá)到68.69％和46.83％。 應(yīng)用凝膠色譜法Sephadex G-100(1.6×100)分離

4、多糖ECP-A后得組分ECP-A1和ECP-A2，分離多糖ECP<'＃>-A后得組分ECP<'＃>-Al和ECP<'＃>-A2，經(jīng)透析，凍干，經(jīng)進(jìn)一步的凝膠層析證明ECP-A1，ECP-A2，ECP<'＃>-A1和ECP<'＃>-A2均為單一組分；紫外光譜掃描表明ECP-A，ECP<'＃>-A，ECP-A1，ECP-A2，ECP<'＃>-A1和ECP<'＃>-A2在260nm和280nm均無明顯的吸收，表明這六部分中蛋白質(zhì)和核酸的含量都

5、很低或無；運(yùn)用凝膠柱層析法測定ECP-A1，ECP-A2，ECP<'＃>-A1和ECP<'＃>-A2的分子量分別為8.61×10<'4>D，1.75×10<'4>D，1.18×10<'5>D和2.6×10<'4>D。氣相色譜分析表明ECP-A1，ECP-A2，ECP<'＃>-Al和ECP<'＃>-A2主要由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖等單糖組成。其組成摩爾比分別為12.73∶2.47：23.75∶1∶1.79；0.97∶3.

6、13∶2.76：1∶0.81；0.18∶0.93∶0.05∶1∶0.23；1.43∶6.31∶0.73∶1∶0.85。 運(yùn)用高碘酸氧化和Smith降解相結(jié)合IR圖譜對冠突散囊菌多糖進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。分析表明ECP-A1，ECP-A2，ECP<'＃>-A1和ECP<'＃>-A2是以α(1→3)、α(1→6)、α(1→2)或α(1→4)糖苷鍵連接的多糖；單糖殘基以吡喃型存在；IR結(jié)果表明該多糖是一種不含糖醛酸的中性雜多糖或糖醛全部以鈉鹽