阿利吉侖對(duì)腫瘤惡病質(zhì)進(jìn)程的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　本研究通過(guò)建立小鼠惡病質(zhì)模型，觀察腎素抑制劑阿利吉侖(Aliskiren，ASK)對(duì)腫瘤惡病質(zhì)進(jìn)程的影響，并探討其對(duì)炎性細(xì)胞因子、氧化應(yīng)激水平、自噬-溶酶體系統(tǒng)及泛素蛋白酶體路徑相關(guān)因子表達(dá)的影響。
　　方法：
　　64只健康雄性BALB／c小鼠隨機(jī)分為4個(gè)組，每組16只：健康對(duì)照組（HC）；腫瘤惡病質(zhì)組（CA）；ASK預(yù)防組（AP）；ASK治療組（AT）。于CA、AP和AT組小鼠左側(cè)腋窩皮下接種處于對(duì)數(shù)增

2、殖期的小鼠 CT26細(xì)胞（每只約1×106個(gè)腫瘤細(xì)胞)，建立腫瘤惡病質(zhì)動(dòng)物模型。接種后每日定時(shí)觀察小鼠精神狀態(tài)、毛發(fā)顏色及光澤；測(cè)量體質(zhì)量及腫瘤結(jié)節(jié)生長(zhǎng)情況；檢測(cè)小鼠自發(fā)性活動(dòng)。AP和AT組分別于接種后第5天（可觸及明顯腫瘤結(jié)節(jié)）和第12天（小鼠進(jìn)入惡病質(zhì)狀態(tài)）開(kāi)始給予ASK10mg/(kg·d)灌胃。HC和CA組給予等量PBS代替。第20天，運(yùn)用握力計(jì)檢測(cè)小鼠肌力；采用旋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠全身機(jī)動(dòng)性和協(xié)調(diào)性。第20天，每組取8只小鼠眼球摘

3、除取血后，剝離腫瘤及腓腸肌并稱重。HE染色法觀察腓腸肌橫切面情況；ELISA法檢查血清血管緊張素（angiotensin，Ang）Ⅰ、AngⅡ水平及血清和腓腸肌TNF-α、IL-6水平；羥氨法和原型谷胱甘肽法檢測(cè)腓腸肌中SOD和GSH-Px活性；TBA法及Fenton反應(yīng)測(cè)定腓腸肌中?OH和MDA水平；Real-time PCR檢測(cè)腓腸肌Bnip3、LC3、Beclin1、MuRF1、Atrogin1和Caspase3 mRNA表達(dá)水平

4、；Western bolt檢測(cè)腓腸肌Bnip3、LC3-Ⅰ/Ⅱ、Beclin1、MuRF1、Atrogin1蛋白表達(dá)水平。各組其余8只小鼠用于監(jiān)測(cè)自發(fā)性活動(dòng)及記錄生存時(shí)間。
　　結(jié)果：
　　1.小鼠一般情況及體重變化
　　接種后第5天，荷瘤小鼠皮下可觸及腫瘤結(jié)節(jié)。第12天，與HC組比較，AT和CA組小鼠出現(xiàn)毛發(fā)粗糙、失去光澤，精神萎靡，體重顯著下降(P<0.05)等惡病質(zhì)表現(xiàn)，而AP組體重下降不如AT和CA組明顯。第2

5、0天，AP、AT組小鼠經(jīng)ASK干預(yù)后體質(zhì)量較CA組均增加，且AP組高于AT組(P<0.05)。CA組去瘤體重較初始體重下降了32.67％，而AT和AP組分別為21.21%及12.42%。
　　2.腫瘤組織及骨骼肌消耗情況
　　與 CA組比較，AT組小鼠腫瘤質(zhì)量和體積分別下降了29.23%和14.85%，AP組腫瘤質(zhì)量和體積分別下降了39.16%和34.59%(P<0.05)。CA組腓腸肌質(zhì)量及纖維橫切面面積均明顯低于HC組(

6、P<0.01)。與CA組比較，AT、AP組兩者均有所增加(P<0.05)。
　　3.小鼠全身功能、自發(fā)性活動(dòng)及生存時(shí)間
　　AT組小鼠肌力及旋轉(zhuǎn)停留時(shí)間，與CA組比較分別增加了21.17%和16.98%，AP組小鼠則分別增加了39.06%和34.56%。與CA組比較， AT和AP組小鼠自發(fā)性活動(dòng)及生存時(shí)間均增加，且AP組預(yù)防效果更佳(P<0.05)。
　　4.小鼠RAS和炎性細(xì)胞因子水平
　　與CA組比較，AP和

7、AT組經(jīng)ASK干預(yù)后，血清AngⅠ和AngⅡ水平均下降，且AP組下降程度大于AT組(P<0.05)。與CA組比較， AT和AP組血清及腓腸肌組織TNF-α和IL-6水平均有所下降，且AP組下降程度大于AT組(P<0.05)。
　　5.小鼠腓腸肌氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)
　　與CA組比較，AT和AP組SOD和GSH-Px活性均增加，而?OH和MDA水平均下降，且AP組預(yù)防效果更佳(P<0.05)。
　　6.小鼠腓腸自噬溶酶體路徑

8、及泛素蛋白酶體系統(tǒng)相關(guān)因子表達(dá)情況
　　與CA組比較，AP和AT組Bnip3、LC3、Beclin1、MuRF1和Atrogin1 mRNA及蛋白表達(dá)水平均下降，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低，且AP組下降較AT組明顯(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　ASK能明顯緩解腫瘤惡病質(zhì)小鼠體重減輕，抑制腫瘤生長(zhǎng)，改善全身功能，抑制骨骼肌消耗，增加自發(fā)性活動(dòng)及生存期。且ASK早期預(yù)防效果更佳。
　　ASK的上述作用可能與