CILP2增加氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的泡沫細(xì)胞形成及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分、CILP2表達(dá)上調(diào)對(duì)氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的泡沫細(xì)胞形成的影響
　　目的：
　　在體外，建立泡沫細(xì)胞模型，探討CILP2表達(dá)上調(diào)，是否對(duì)氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的泡沫細(xì)胞形成產(chǎn)生影響。
　　方法：
　　用佛波酯（PMA）處理THP-1細(xì)胞24小時(shí)，誘導(dǎo)成巨噬細(xì)胞。誘導(dǎo)成功后與氧化低密度脂蛋白相互作用24小時(shí)，在體外建立泡沫細(xì)胞模型。用腺病毒載體Ad-CILP2感染巨噬細(xì)胞，實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-PCR）檢

2、測(cè)CILP2表達(dá)上調(diào)的效率，油紅染色處理細(xì)胞爬片，觀(guān)察CILP2表達(dá)上調(diào)，對(duì)氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的泡沫細(xì)胞形成的影響。
　　結(jié)果：
　　油紅染色結(jié)果顯示泡沫細(xì)胞體外模型構(gòu)建成功。利用Ad-CILP2感染細(xì)胞后，巨噬細(xì)胞內(nèi)CILP2 mRNA水平明顯增高(P＜0.01)，且Ad-CILP2+oxLDL組比Ad-GFP+oxLDL組泡沫細(xì)胞形成明顯增多。
　　結(jié)論：
　　CILP2增加氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的泡沫細(xì)胞形

3、成。
　　第二部分、CILP2上調(diào)增加氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的泡沫細(xì)胞形成過(guò)程的機(jī)制研究
　　目的：
　　探討CILP2上調(diào)增加氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的泡沫細(xì)胞形成過(guò)程的可能機(jī)制。
　　方法：
　　用熒光標(biāo)記的氧化型低密度脂蛋白（Dil-oxLDL）作用于巨噬細(xì)胞，熒光倒置顯微鏡觀(guān)察對(duì)脂質(zhì)的攝取情況。利用RT-PCR檢測(cè)介導(dǎo)脂質(zhì)攝取的清道夫受體CD36、LOX-1、SR-A mRNA的表達(dá)。利用western

4、blot檢測(cè)CD36蛋白水平的表達(dá)。利用RT-PCR檢測(cè)參與膽固醇外流調(diào)節(jié)的ABCA1、ABCG1 mRNA的表達(dá)。用PPAR-γ預(yù)處理細(xì)胞24小時(shí)后，利用RT-PCR檢測(cè)CD36、LOX-1 mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　CILP2增加熒光標(biāo)記的氧化型低密度脂蛋白的攝取。與Ad-GFP+oxLDL組比，Ad-CILP2+oxLDL組CD36 mRNA的表達(dá)明顯升高(P＜0.01),LOX-1 mRNA的表達(dá)明顯升高（P

5、＜0.05），但CILP2表達(dá)上調(diào)對(duì)SR-A、ABCA1、ABCG1 mRNA的表達(dá)無(wú)影響。CILP2使CD36蛋白的表達(dá)增加(P＜0.01)。巨噬細(xì)胞給予PPAR-γ激動(dòng)劑后，CD36 mRNA的表達(dá)升高（P＜0.05）。而給予PPAR-γ抑制劑后，CD36 mRNA的表達(dá)降低（P＜0.05）。用PPAR-γ激動(dòng)劑、抑制劑處理對(duì)LOX-1 mRNA的表達(dá)無(wú)影響。
　　結(jié)論:
　　CILP2通過(guò)PPAR-γ信號(hào)通路的激活作用