氧化低密度脂蛋白檢測(cè)及臨床應(yīng)用研究.pdf

1、目的：(1)人血清中氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)自身抗體提取和鑒定。(2)分別采用自身抗體和多克隆抗體建立血清ox-LDL 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)并進(jìn)行臨床研究。(3)分析不同程度氧化、修飾低密度脂蛋白(LDL)特性變化，為ox-LDL 檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化提供依據(jù)。(4)探討ox-LDL 水平在動(dòng)脈粥樣硬化(As)性心腦血管疾病中的變化，準(zhǔn)確評(píng)價(jià)其臨床價(jià)值。(5)采用自身抗體和多克隆抗體的ELISA 法測(cè)定結(jié)果間比較。
　　

2、 方法：(1)采用溴化氰活化的瓊脂糖凝膠sepharose 4B 交聯(lián)ox-LDL 制備免疫吸附層析柱，從正常人血清中提取抗ox-LDL 自身抗體。(2)分別建立以抗ox-LDL自身抗體、抗ox-LDL 多克隆抗體為包被抗體，酶標(biāo)抗載脂蛋白B（apoB)為檢測(cè)抗體的ox-LDL ELISA 檢測(cè)法。(3)分別采用不同濃度的Cu2+和丙二醛(MDA)對(duì)LDL 進(jìn)行氧化、修飾，觀察不同時(shí)相硫代巴比妥酸反應(yīng)物質(zhì)(TBARS)、共軛雙烯(CD

3、)和氧化位點(diǎn)等特性的改變。(4)采用ELISA 法測(cè)定139 例冠心病(CHD)組患者[急性冠狀動(dòng)脈綜合征(ACS）76 例，非ACS 組63 例]血漿ox-LDL 水平，根據(jù)冠狀動(dòng)脈造影結(jié)果將冠心病組分為多支病變組、雙支病變組及單支病變組進(jìn)行比較。
　　 結(jié)果：(1）經(jīng)親和層析提取正常人血清中存在的抗ox-LDL 自身抗體，與ox-LDL 具有良好的反應(yīng)性；(2)氧化、修飾的LDL 結(jié)構(gòu)和生物特性發(fā)生改變，產(chǎn)生了新的氧化位點(diǎn)，

4、同時(shí)部分原有位點(diǎn)被隱蔽；采用ox-LDL 自身抗體建立的ELISA 法測(cè)定ox-LDL位點(diǎn)變化較多克隆抗體更為明顯；(3)冠心病患者中，ACS組患者和非ACS 組患者ox-LDL 水平均顯著高于正常對(duì)照組[ACS:（188.01±69.88)mg/L，非ACS:（137.88±59.74）mg/L，對(duì)照組:（82.68±29.06）mg/L; P 均<0.001]；
　　 且ACS 組患者ox-LDL 水平顯著高于非ACS 組患

5、者(P<0.001)。冠狀動(dòng)脈多支、雙支、單支病變組間ox-LDL 水平不同[(183.63±79.42）mg/L，(164.15±63.79）mg/L和(146.97±58.40）mg/L，P<0.05]，多支高于單支(P<0.01)。多因素分析顯示冠狀動(dòng)脈病變程度僅與ox-LDL 相關(guān)(R2=0.048，β=0.217，P=0.000)。(4）兩種ELISA 方法所測(cè)結(jié)果相關(guān)性顯著(r=0.502，P=0.000)；受試者工作特征(

6、ROC)曲線(xiàn)顯示，自身抗體和多克隆抗體法分析冠心病組的曲線(xiàn)下面積(AUC)分別為0.706和0.894，ACS 組的AUC 分別為0.741和0.948，非ACS 組的AUC 分別為0.661和0.826；兩種方法差異顯著(冠心病組：u=5.01，P<0.001；ACS 組：u=5.47，P<0.001；非ACS 組：u=3.52，P<0.001)。
　　 結(jié)論：(1）采用自身抗體建立的ox-LDL 檢測(cè)法能更真實(shí)、準(zhǔn)確反映ox