氧化低密度脂蛋白檢測(cè)及臨床應(yīng)用研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:(1)人血清中氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)自身抗體提取和鑒定。(2)分別采用自身抗體和多克隆抗體建立血清ox-LDL 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)并進(jìn)行臨床研究。(3)分析不同程度氧化、修飾低密度脂蛋白(LDL)特性變化,為ox-LDL 檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化提供依據(jù)。(4)探討ox-LDL 水平在動(dòng)脈粥樣硬化(As)性心腦血管疾病中的變化,準(zhǔn)確評(píng)價(jià)其臨床價(jià)值。(5)采用自身抗體和多克隆抗體的ELISA 法測(cè)定結(jié)果間比較。
  

2、 方法:(1)采用溴化氰活化的瓊脂糖凝膠sepharose 4B 交聯(lián)ox-LDL 制備免疫吸附層析柱,從正常人血清中提取抗ox-LDL 自身抗體。(2)分別建立以抗ox-LDL自身抗體、抗ox-LDL 多克隆抗體為包被抗體,酶標(biāo)抗載脂蛋白B(apoB)為檢測(cè)抗體的ox-LDL ELISA 檢測(cè)法。(3)分別采用不同濃度的Cu2+和丙二醛(MDA)對(duì)LDL 進(jìn)行氧化、修飾,觀察不同時(shí)相硫代巴比妥酸反應(yīng)物質(zhì)(TBARS)、共軛雙烯(CD

3、)和氧化位點(diǎn)等特性的改變。(4)采用ELISA 法測(cè)定139 例冠心病(CHD)組患者[急性冠狀動(dòng)脈綜合征(ACS)76 例,非ACS 組63 例]血漿ox-LDL 水平,根據(jù)冠狀動(dòng)脈造影結(jié)果將冠心病組分為多支病變組、雙支病變組及單支病變組進(jìn)行比較。
   結(jié)果:(1)經(jīng)親和層析提取正常人血清中存在的抗ox-LDL 自身抗體,與ox-LDL 具有良好的反應(yīng)性;(2)氧化、修飾的LDL 結(jié)構(gòu)和生物特性發(fā)生改變,產(chǎn)生了新的氧化位點(diǎn),

4、同時(shí)部分原有位點(diǎn)被隱蔽;采用ox-LDL 自身抗體建立的ELISA 法測(cè)定ox-LDL位點(diǎn)變化較多克隆抗體更為明顯;(3)冠心病患者中,ACS組患者和非ACS 組患者ox-LDL 水平均顯著高于正常對(duì)照組[ACS:(188.01±69.88)mg/L,非ACS:(137.88±59.74)mg/L,對(duì)照組:(82.68±29.06)mg/L; P 均<0.001];
   且ACS 組患者ox-LDL 水平顯著高于非ACS 組患

5、者(P<0.001)。冠狀動(dòng)脈多支、雙支、單支病變組間ox-LDL 水平不同[(183.63±79.42)mg/L,(164.15±63.79)mg/L和(146.97±58.40)mg/L,P<0.05],多支高于單支(P<0.01)。多因素分析顯示冠狀動(dòng)脈病變程度僅與ox-LDL 相關(guān)(R2=0.048,β=0.217,P=0.000)。(4)兩種ELISA 方法所測(cè)結(jié)果相關(guān)性顯著(r=0.502,P=0.000);受試者工作特征(

6、ROC)曲線(xiàn)顯示,自身抗體和多克隆抗體法分析冠心病組的曲線(xiàn)下面積(AUC)分別為0.706和0.894,ACS 組的AUC 分別為0.741和0.948,非ACS 組的AUC 分別為0.661和0.826;兩種方法差異顯著(冠心病組:u=5.01,P<0.001;ACS 組:u=5.47,P<0.001;非ACS 組:u=3.52,P<0.001)。
   結(jié)論:(1)采用自身抗體建立的ox-LDL 檢測(cè)法能更真實(shí)、準(zhǔn)確反映ox

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