整合素β4在肝細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制研究.pdf

1、第一部分：整合素β4在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其與肝癌臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系
　　目的：比較整合素β4（integrinβ4，ITGB4）在人肝細(xì)胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）組織及對(duì)應(yīng)的癌旁組織中的表達(dá)差異，比較整合素β4在不同肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)差異，分析整合素β4與肝癌臨床病理學(xué)特征之間的聯(lián)系，探討整合素β4在肝癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用。
　　方法：選取華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院肝臟外科中

2、心手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)為肝細(xì)胞癌的手術(shù)標(biāo)本68例，選取具有不同轉(zhuǎn)移能力的肝癌細(xì)胞系7株，利用western-blot，免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry，IHC）等方法檢測(cè)整合素β4在癌與癌旁組織之間以及不同細(xì)胞系之間的表達(dá)情況，通過統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析整合素β4表達(dá)情況對(duì)肝癌臨床病理特征的影響。
　　結(jié)果：整合素β4在人肝癌組織中高表達(dá)，而在癌旁組織中低表達(dá)或不表達(dá)。癌組織中高表達(dá)的整合素β4與腫瘤的局部侵襲和低分

3、化程度呈正相關(guān)。整合素β4在具有高侵襲轉(zhuǎn)移能力的肝癌細(xì)胞系中（HLF, MHCC97L, MHCC97H, HCCLM3）高表達(dá)，而在低侵襲轉(zhuǎn)移能力的肝癌細(xì)胞系中（Hep3B, HepG2, Huh7）低表達(dá)或不表達(dá)。
　　結(jié)論：整合素β4在肝癌組織及具有高轉(zhuǎn)移能力的肝癌細(xì)胞系中高表達(dá)，起促進(jìn)肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用。
　　第二部分：整合素β4對(duì)肝癌細(xì)胞錨著非依賴性生長(zhǎng)的影響及其機(jī)制
　　目的：研究整合素β4（integri

4、nβ4，ITGB4）對(duì)肝癌細(xì)胞錨著非依賴性生長(zhǎng)（anchorage independence）的影響以及調(diào)控該行為的機(jī)制。
　　方法：選擇高表達(dá)整合素β4的肝癌細(xì)胞系HCCLM3和HLF，用RNA干擾（RNAi）技術(shù)敲減整合素β4的表達(dá)，利用上述改造后的細(xì)胞系通過軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)（soft agarose colony formation），失巢凋亡分析（anoikis assay）研究整合素β4對(duì)肝癌錨著非依賴性生長(zhǎng)的影響。通

5、過 western blot，免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP)，細(xì)胞免疫熒光等技術(shù)研究整合素β4調(diào)控的細(xì)胞信號(hào)通路對(duì)肝癌細(xì)胞錨著非依賴性生長(zhǎng)的影響。
　　結(jié)果：整合素β4增強(qiáng)肝癌細(xì)胞錨著非依賴性生長(zhǎng)；整合素β4通過活化AKT/PKB信號(hào)通路來促進(jìn)錨著非依賴性生長(zhǎng)；整合素β4與表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）以配體非依賴的方式結(jié)合來促

6、進(jìn)錨著非依賴性生長(zhǎng)；ITGB4-EGFR復(fù)合物通過FAK（focal adhesion kinase）而不是Src來激活A(yù)KT信號(hào)通路。
　　結(jié)論：ITGB4-EGFR復(fù)合物通過活化FAK-AKT信號(hào)通路來促進(jìn)肝癌細(xì)胞錨著非依賴性生長(zhǎng)。
　　第三部分整合素β4在體內(nèi)對(duì)肝癌生長(zhǎng)及肺轉(zhuǎn)移的影響
　　目的：研究整合素β4在體內(nèi)對(duì)肝癌生長(zhǎng)及肺轉(zhuǎn)移的影響。
　　方法：利用裸鼠皮下成瘤模型研究整合素β4對(duì)肝癌在體內(nèi)生長(zhǎng)的影響