核桃多肽對(duì)體內(nèi)外老年癡呆實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷母深A(yù)作用研究.pdf

1、本論文主要對(duì)核桃多肽對(duì)老年癡呆的干預(yù)作用進(jìn)行了研究，主要內(nèi)容分為兩個(gè)部分：第一部分研究了核桃多肽對(duì)過氧化氫（H2O2）及β淀粉樣多肽蛋白（Aβ25-35）誘導(dǎo)的大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤（PC12）細(xì)胞損傷的影響，同時(shí)在細(xì)胞水平上探討核桃多肽神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制。第二部分首先研究了核桃多肽的急性毒性和亞急性毒性，為后期的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)同時(shí)確定了給藥劑量，其次在毒理性實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上探討了核桃多肽對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)的老年癡呆小鼠的神經(jīng)保護(hù)作用及

2、其機(jī)制，為其應(yīng)用于神經(jīng)退行性疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為阿爾茨海默?。ˋD）藥物防治研究提供理論依據(jù)。
　　第一部分：
　　目的：探討核桃多肽對(duì)H2O2及β-淀粉樣多肽（Aβ25-35）導(dǎo)致的PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。探討核桃多肽對(duì)H2O2及β-淀粉樣多肽（Aβ25-35）導(dǎo)致的PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。
　　方法：以H2O2及Aβ25-35損傷PC12細(xì)胞建立氧化應(yīng)激損傷模型，以不同濃度核桃多肽（0.1、0.25、0.5

3、、0.75、1、2mgL-1)預(yù)保護(hù)PC12細(xì)胞，用MTT方法來檢測(cè)細(xì)胞活力；用乳酸脫氫酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、過氧化氫酶（CAT）及谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）等試劑盒來檢測(cè)H2O2及Aβ25-35對(duì)PC12細(xì)胞所造成的氧化損傷，并探討核桃多肽是否具有抗氧化作用。并采用DCFH-DA結(jié)合熒光分光光度計(jì)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的ROS水平，從而進(jìn)一步確定核桃多肽的抗氧化機(jī)制。
　　結(jié)果：MTT結(jié)果顯示，與

4、模型組相比，核桃多肽呈劑量依賴性的提高雙氧水及Aβ25-35誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞存活率；與模型組對(duì)比，核桃多肽處理組明顯提高抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px活性以及明顯降低MDA水平。同時(shí)，給予核桃多肽后細(xì)胞內(nèi)的ROS水平也是顯著下降。
　　結(jié)論：核桃多肽對(duì)雙氧水及β-淀粉樣多肽導(dǎo)致的PC12細(xì)胞損傷具有良好的保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與提高PC12細(xì)胞抗氧化能力有關(guān)。
　　第二部分：
　　目的：核桃多肽對(duì)Aβ25-3

5、5誘導(dǎo)的小鼠記憶損傷的改善作用及其機(jī)制研究。
　　方法：通過雙側(cè)海馬注射Aβ25-35建立老年癡呆模型，并且將小鼠分為正常組、模型組、假手術(shù)組、核桃多肽高劑量組、核桃多肽中劑量組及核桃多肽低劑量組。連續(xù)給藥五周后進(jìn)行水迷宮（MWM）及電跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)。為進(jìn)一步評(píng)價(jià)核桃多肽的抗老年癡呆活性，進(jìn)行了老鼠海馬組織中的SOD、MDA、GSH、NO及AChE水平測(cè)定，ELISA試劑盒測(cè)定海馬內(nèi)8-OHdG、IL-1β、IL-6和TNF-α，Wes

6、tern blot法檢測(cè)海馬內(nèi)iNOS和NF-κB表達(dá)水平。
　　結(jié)果：通過Morris水迷宮及電跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)初步顯示了核桃多肽能顯著改善Aβ25-35小鼠的認(rèn)知障礙和長(zhǎng)期記憶能力，同時(shí)核桃多肽的中高劑量組對(duì)炎癥因子及一些重要的氧化酶都有較好的抑制或者提高作用，ELISA測(cè)試證明核桃多肽能顯著降低8-OHdG、IL-1β、IL-6和TNF-α的水平，Western blot試驗(yàn)表明核桃多肽能下調(diào)海馬內(nèi)NOS和NF-κB表達(dá)水平。