核桃多肽對體內外老年癡呆實驗模型的干預作用研究.pdf

1、本論文主要對核桃多肽對老年癡呆的干預作用進行了研究，主要內容分為兩個部分：第一部分研究了核桃多肽對過氧化氫（H2O2）及β淀粉樣多肽蛋白（Aβ25-35）誘導的大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤（PC12）細胞損傷的影響，同時在細胞水平上探討核桃多肽神經保護作用的機制。第二部分首先研究了核桃多肽的急性毒性和亞急性毒性，為后期的動物實驗奠定了基礎同時確定了給藥劑量，其次在毒理性實驗的基礎上探討了核桃多肽對Aβ25-35誘導的老年癡呆小鼠的神經保護作用及

2、其機制，為其應用于神經退行性疾病提供實驗依據，為阿爾茨海默?。ˋD）藥物防治研究提供理論依據。
　　第一部分：
　　目的：探討核桃多肽對H2O2及β-淀粉樣多肽（Aβ25-35）導致的PC12細胞損傷的保護作用。探討核桃多肽對H2O2及β-淀粉樣多肽（Aβ25-35）導致的PC12細胞損傷的保護作用。
　　方法：以H2O2及Aβ25-35損傷PC12細胞建立氧化應激損傷模型，以不同濃度核桃多肽（0.1、0.25、0.5

3、、0.75、1、2mgL-1)預保護PC12細胞，用MTT方法來檢測細胞活力；用乳酸脫氫酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、過氧化氫酶（CAT）及谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）等試劑盒來檢測H2O2及Aβ25-35對PC12細胞所造成的氧化損傷，并探討核桃多肽是否具有抗氧化作用。并采用DCFH-DA結合熒光分光光度計檢測細胞內的ROS水平，從而進一步確定核桃多肽的抗氧化機制。
　　結果：MTT結果顯示，與

4、模型組相比，核桃多肽呈劑量依賴性的提高雙氧水及Aβ25-35誘導的PC12細胞存活率；與模型組對比，核桃多肽處理組明顯提高抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px活性以及明顯降低MDA水平。同時，給予核桃多肽后細胞內的ROS水平也是顯著下降。
　　結論：核桃多肽對雙氧水及β-淀粉樣多肽導致的PC12細胞損傷具有良好的保護作用，其作用機制可能與提高PC12細胞抗氧化能力有關。
　　第二部分：
　　目的：核桃多肽對Aβ25-3

5、5誘導的小鼠記憶損傷的改善作用及其機制研究。
　　方法：通過雙側海馬注射Aβ25-35建立老年癡呆模型，并且將小鼠分為正常組、模型組、假手術組、核桃多肽高劑量組、核桃多肽中劑量組及核桃多肽低劑量組。連續(xù)給藥五周后進行水迷宮（MWM）及電跳臺實驗。為進一步評價核桃多肽的抗老年癡呆活性，進行了老鼠海馬組織中的SOD、MDA、GSH、NO及AChE水平測定，ELISA試劑盒測定海馬內8-OHdG、IL-1β、IL-6和TNF-α，Wes

6、tern blot法檢測海馬內iNOS和NF-κB表達水平。
　　結果：通過Morris水迷宮及電跳臺實驗初步顯示了核桃多肽能顯著改善Aβ25-35小鼠的認知障礙和長期記憶能力，同時核桃多肽的中高劑量組對炎癥因子及一些重要的氧化酶都有較好的抑制或者提高作用，ELISA測試證明核桃多肽能顯著降低8-OHdG、IL-1β、IL-6和TNF-α的水平，Western blot試驗表明核桃多肽能下調海馬內NOS和NF-κB表達水平。