小鼠老年癡呆模型的建立及甘丙肽的表達(dá)研究.pdf

1、[目的] 運(yùn)用生化、組織、行為學(xué)方法評(píng)價(jià)D一半乳糖引發(fā)老年性癡呆(Alzheimer’sDisease，AD)小鼠模型，測(cè)定海馬腦區(qū)甘丙肽及其受體表達(dá)的變化；探討甘丙肽在AD發(fā)生過程中可能的作用及其機(jī)制。 [方法] 選用20g左右的BL/C57小鼠50只，分為模型組和對(duì)照組，各25只。模型組腹腔注射D-半乳糖150mg/kg，每天一次，連續(xù)90d，制備老年癡呆動(dòng)物模型。對(duì)照組注射等量的0.9％的生理鹽水。

2、 通過Y-型迷宮比較兩組小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，第一天檢測(cè)小鼠學(xué)習(xí)能力，間隔24小時(shí)后檢測(cè)小鼠記憶能力。 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，每組取10只小鼠，測(cè)定蛋白質(zhì)含量和AChE、ChAT、MAO、MDA、GSH-PX、SOD、Na<'+>K<'+>-ATP酶，按試劑盒說明書所述步驟操作。 各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉60mg/kg麻醉，用多聚甲醛進(jìn)行心臟灌流，，取腦感覺運(yùn)動(dòng)區(qū)皮層，置于戊二醛中，透射電鏡觀察。 熒光顯微鏡配合免疫

3、組織化學(xué)觀察小鼠腦的矢狀冷凍切片海馬區(qū)域甘丙肽的表達(dá)，熒光顯微鏡檢測(cè)照相。 Realkime-PCR檢測(cè)小鼠腦區(qū)前額葉、中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)中甘丙肽及其受體1、2、3表達(dá)狀況。 [結(jié)果] (1)行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果說明模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力明顯低于對(duì)照小鼠． (2)生化指標(biāo)檢測(cè)出模型組AChE、ChAT、GSH-PX、SOD、Na<'+>K<'+>-ATP酶活性明顯降低，MAO活性上升，MDA含量明顯上升。

4、 (3)電鏡病理切片顯示模型組的細(xì)胞核明顯萎縮；線粒體嵴消失，或產(chǎn)生空泡。對(duì)照組細(xì)胞核正常，線粒體嵴清晰。 (4)免疫熒光檢測(cè)海馬區(qū)域甘丙肽含量表達(dá)差異，模型組甘丙肽表達(dá)明顯高于對(duì)照組。 (5)Realtime-PCR檢測(cè)出模型組前額葉、中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)區(qū)域甘丙肽及其受體1、2、3的mRNA含量高于對(duì)照組。 [結(jié)論] (1)模型建立比較成功，為實(shí)驗(yàn)提供可靠的前提。 (2) 老年癡呆小鼠氧化還原