黃連解毒湯對(duì)老年癡呆模型藥效學(xué)及神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用的研究.pdf

1、黃連解毒湯為清熱解毒的代表方劑，具有抗菌、降糖、降脂、抗氧化、神經(jīng)保護(hù)等藥理作用，對(duì)許多種疾病具有一定的治療效果。本研究作為國家自然基金課題“黃連解毒湯異病同治療效原理與配伍規(guī)律基礎(chǔ)研究”的一部分，以黃連解毒湯對(duì)老年癡呆(AD)模型的干預(yù)作用為切入點(diǎn)，對(duì)黃連解毒湯及其主要藥效成分的藥效學(xué)和對(duì)神經(jīng)細(xì)胞損傷保護(hù)作用進(jìn)行研究，從而為該方劑“異病同治”相關(guān)理論和臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本研究主要包括以下部分：
　　1黃連解毒湯治療AD的中醫(yī)

2、理論基礎(chǔ)：近年來中醫(yī)理論與臨床研究顯示，“毒損腦絡(luò)”是老年癡呆發(fā)生的主要病機(jī)，濁毒損傷腦時(shí)，腦竅壅塞，神機(jī)失用則發(fā)生癡呆。黃連解毒湯治療老年癡呆具有一定的臨床療效，源自該方是清熱解毒的代表方劑，解毒為其治療AD作用提供了理論基礎(chǔ)。
　　2黃連解毒湯及其主要藥效成分小檗堿對(duì)AD模型大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的干預(yù)作用：采用Aβ1-42雙側(cè)海馬CA1區(qū)注射，制備AD模型大鼠。實(shí)驗(yàn)分為8組，分別為：Ⅰ組空白組，Ⅱ組假手術(shù)組，Ⅲ組模型組，Ⅳ組陽性藥

3、組(鹽酸多奈哌齊：2mg·kg-1.d-1)，Ⅴ組黃連解毒湯大劑量組(11.5g·kg-1.d-1)，Ⅵ組黃連解毒湯中劑量組(5.75g·kg-1.d-1)，Ⅶ組黃連解毒湯小劑量組(2.875g·kg-1.d-1)，Ⅷ組小檗堿組(100mg·kg-1.d-1)。應(yīng)用Morris水迷宮檢測(cè)模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力。結(jié)果顯示，黃連解毒湯各給藥組體重較假手術(shù)組降低，與模型組比較無明顯差異，小檗堿組體重高于模型組，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

4、。水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著訓(xùn)練時(shí)間延長(zhǎng)，各組大鼠總游程及潛伏期逐漸降低。小劑量黃連解毒湯組與小檗堿組對(duì)AD模型學(xué)習(xí)記憶能力有一定的改善作用。
　　3黃連解毒湯及其主要成分對(duì)AD模型大鼠血清炎性因子(IL-1β，IL-6，TNF-α)及INS的影響：通過放免的方法檢測(cè)各組大鼠血清炎性因子(IL-1β，IL-6，TNF-α)及INS的變化，結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，大鼠血清IL-1β含量降低；模型組及各給藥組血清IL-6含量增高，其中

5、模型組與小檗堿組增加明顯；各組大鼠血清TNF-α含量無明顯不同。血清胰島素水平檢測(cè)顯示，黃連解毒湯各劑量組及鹽酸多奈哌齊組大鼠血清INS水平高于模型組與假手術(shù)組，提示黃連解毒湯、小檗堿對(duì)學(xué)習(xí)記憶改善作用與IL-1β，IL-6及INS相關(guān)。
　　4黃連解毒湯及其主要成分對(duì)神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用的比較：制備H2o2，Glu損傷SH-SY5Y，Neuro-2a細(xì)胞模型，設(shè)正常對(duì)照、模型、黃連解毒湯、小檗堿、黃芩苷、巴馬汀及梔子苷組，篩選濃度為

6、7.8125，15.625，31.25，62.5，125，250，500 ug·mL-1，應(yīng)用MTT法檢測(cè)藥物對(duì)損傷后細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果顯示黃連解毒湯能夠促進(jìn)SH-SY5Y細(xì)胞增殖，適當(dāng)濃度的梔子苷能夠促進(jìn)SH-SY5Y，Neuro-2a細(xì)胞增殖，并對(duì)H2O2，Glu損傷的SH-SY5Y細(xì)胞有保護(hù)作用，對(duì)H2O2損傷的Neuro-2a也具有保護(hù)作用。梔子苷可能為黃連解毒湯對(duì)神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用的有效成分。
　　綜上所述，本文從中醫(yī)基

7、礎(chǔ)理論分析黃連解毒湯抗AD作用的潛在原理，通過實(shí)驗(yàn)觀察其對(duì)AD模型大鼠學(xué)習(xí)記憶的改善作用及作用的可能機(jī)制，并應(yīng)用體外細(xì)胞模型比較黃連解毒湯及其主要成分對(duì)神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用。發(fā)現(xiàn)小劑量黃連解毒湯、小檗堿能夠改善擬AD大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力；改善作用與血清胰島素含量，炎癥因子IL-6、IL-1β含量相關(guān)。梔子苷具有對(duì)神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)的作用。本文的研究為中藥復(fù)方抗AD作用的研究提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，并為黃連解毒湯“異病同治”AD作用療效原理提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。