MicroRNA及蛋白水解酶在人退變髓核組織中的表達及作用的實驗研究.pdf

1、目的:
　　檢測人正常與退變椎間盤髓核組織中microRNA(miRNA)及蛋白水解酶的表達水平,并通過生物信息預測的方法,找到兩者之間的對應關(guān)系,探討其對椎間盤退變的影響。為深入探索microRNA在人退變椎間盤中調(diào)控相應蛋白水解酶的作用提供前期理論支持。
　　方法:
　?、賹φ战M(Normal):正常椎間盤髓核組織,取自2013年4月至2013年11月因外傷性脊柱骨折于蘇州大學附屬第二醫(yī)院脊柱外科住院的手術(shù)患者,共

2、5例(男3例,女2例),平均年齡40.60(30-50)歲。
　?、趯嶒灲M(IVDD):退變椎間盤髓核組織,取自同期因腰椎間盤突出癥于蘇州大學附屬第二醫(yī)院脊柱外科住院的手術(shù)患者。共20例(男10例,女10例),平均年齡45.20(16~65)歲。
　　對所有取到的標本我們常規(guī)制作石蠟切片,使用HE染色對兩組標本進行組織形態(tài)學觀察和病理學判斷;通過生物信息預測的方法預測所要檢測的microRNA的靶基因—蛋白水解酶基因,進而使

3、用實時熒光定量PCR方法檢測兩組髓核組織中microRNA及相應的蛋白水解酶基因的表達水平。
　　結(jié)果:
　　1.脊柱骨折患者髓核組織切片HE染色表現(xiàn)為細胞數(shù)目多,細胞體積較小,呈類圓形,形似軟骨細胞,位于軟骨陷窩內(nèi),散在分布于細胞外基質(zhì)中并被其包繞,并可見少數(shù)的細胞團,膠原纖維有序排列于類軟骨細胞周圍形成規(guī)整網(wǎng)狀結(jié)構(gòu);腰椎間盤突出癥患者髓核組織主要表現(xiàn)為細胞數(shù)目減少,胞質(zhì)空泡樣變性,細胞溶解,影像不清晰,凋亡細胞數(shù)目增多,

4、并出現(xiàn)細胞聚集現(xiàn)象,周圍膠原纖維排列紊亂,其間出現(xiàn)裂隙。HE染色切片顯示,所取脊柱骨折患者髓核組織均為正常髓核組織,無明顯退變發(fā)生;所取腰椎間盤突出癥患者髓核組織均符合椎間盤退變的病理形態(tài)學改變。
　　2.RT-PCR各項檢測結(jié)果以均數(shù)±標準差表示,計量資料比較采用t檢驗分析證實,當P<0.05時組間差異有統(tǒng)計學意義。生物信息預測發(fā)現(xiàn)人類miR-663b,miR-625-5p的靶基因分別為MMP-2,ADAMTS-4的mRNA,而

5、miR-623的靶基因同時為MMP-3和MMP-13的mRNA。RT-PCR結(jié)果顯示,在退變椎間盤髓核組織中,miR-663b表達水平明顯降低,而miR-625-5p及miR-623在兩組標本中的變化無統(tǒng)計學意義;但在退變髓核組織中,蛋白水解酶MMP-2,ADAMTS-4,MMP-3,MMP-13的mRNA表達水平明顯升高,具有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論:
　　在退變椎間盤中,蛋白水解酶MMP-2,ADAMTS-4,MMP-3,