MZH29治療FLT3-ITD突變型急性髓性白血病的作用機制研究.pdf

1、急性髓性白血病(Acute Myeloid Leukemia，AML)中約有三分之一的患者是由于FLT3酪氨酸激酶的突變引起的，其中內(nèi)部串聯(lián)型(Internal Tandem Duplication，ITD)突變患者預后極差。以FLT3為靶點用于治療FLT3突變型AML的藥物開發(fā)是當前研究的熱點之一。AC220(Quizartinib)是目前已知的十分具有開發(fā)潛力的FLT3抑制劑之一，并處于臨床Ⅲ期研究階段。但包括AC220在內(nèi)的許多F

2、LT3抑制劑，尤其是TypeⅡ的FLT3抑制劑，所面臨的主要問題是患者一般服用3個月后會發(fā)生進一步的點突變而產(chǎn)生耐藥性。因此，繼續(xù)尋找具有FLT3抑制活性且對耐藥突變有效的化合物，并詳細闡述藥物作用機制是當前亟需解決的問題，也是本研究的主要目的。
　　本課題前期通過對c-MET激酶抑制劑LS177進行了46種絡氨酸激酶抑制作用的體外篩選實驗，發(fā)現(xiàn)LS177同時具有FLT3激酶抑制活性，但隨后發(fā)現(xiàn)LS177對FLT3-ITD突變細胞

3、系MV4-11的抑制活性顯著弱于陽性對照藥AC220。經(jīng)過對一系列化合物的篩選，最終設計合成并篩選出4-苯氧基喹啉衍生物MZH29。MZH29對體外表達的FLT3-WT和FLT3-ITD激酶具有強的抑制活性，半數(shù)有效抑制濃度(IC50)分別為9nM和7nM，活性強度與AC220相同;MZH29同時對FLT3-WT依賴性的AML細胞系和FLT3-ITD突變型細胞系具有抑制作用，在FLT3-ITD突變型白血病細胞系上的IC50均低于1nM。

4、在促凋亡作用實驗中，MZH29同時對FLT3-WT依賴性的AML細胞系和FLT3突變型細胞系具有顯著的促凋亡作用，主要通過促進凋亡蛋白Cleaved Caspase3和Cleaved PARP的表達上調(diào)。
　　為了明確MZH29對耐藥突變細胞株的抑制作用情況，體外構建了各種耐藥突變細胞系，結果表明MZH29對耐藥突變型細胞系，包括FLT3-ITD-F691L，F(xiàn)LT3-D835H/Y/V和FLT3-K663Q突變細胞系的生長均具有

5、很強的抑制作用，且明顯優(yōu)于陽性對照藥AC220，在FLT3-K663Q和FLT3-ITD-F691L突變細胞上的抑制活性強度分別是AC220的47倍和40倍。在信號通路方面，MZH29主要通過抑制FL、3及其下游的STAT5和ERK的磷酸化而抑制細胞的增殖，MZH29對FLT3-ITD-F691L和FLT3-ITD-D835Y耐藥突變細胞系的FLT3及其下游磷酸化信號通路仍然具有抑制作用，表明MZH29能夠用于治療FLT3耐藥突變型的A

6、ML。通過Docking的方法計算了MZH29與FLT3的作用方式，MZH29能夠結合于非活性狀態(tài)FLT3的激酶結構域，并發(fā)現(xiàn)MZH29與FLT3-F691L耐藥突變?nèi)阅苄纬煞€(wěn)定的結合構象，解釋了MZH29對耐藥突變有效的作用機制，同時也暗示著MZH29可能屬于TypeⅡ的FLT3抑制。體內(nèi)實驗中，通過構建皮下種植瘤和血液瘤兩種模型證實了MZH29的藥物活性?？诜﨧ZH2910mg/kg可以完全抑制小鼠皮下移植瘤生長和顯著延長血液種植瘤