雷帕霉素對(duì)FLT3-ITD陽性急性髓系白血病細(xì)胞株的影響.pdf

1、目的：本研究擬選擇健康志愿者骨髓單個(gè)核細(xì)胞及FLT3-ITD陽性人AML細(xì)胞株—MV4-11為對(duì)象，首先探究mTOR通路在FLT3-ITD陽性急性髓系白血病中的表達(dá)情況。在此基礎(chǔ)上觀察雷帕霉素對(duì)FLT3-ITD突變陽性的AML細(xì)胞株（MV4-11）的增殖及細(xì)胞周期的影響，并探討PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路及mTOR下游分子蛋白4E-BP1及p70S6K在此過程中的作用。方法：取MV4-11細(xì)胞，依據(jù)加入雷帕霉素濃度的不同分為對(duì)照組

2、及實(shí)驗(yàn)組,培養(yǎng)24小時(shí)后，用CCK-8法檢測(cè)白血病細(xì)胞的增殖活性，流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)白血病細(xì)胞周期，western-blot方法檢測(cè)mTOR、4E-BP1、p70S6K及磷酸化蛋白的表達(dá)情況，RT-PCR檢測(cè)mRNA水平的表達(dá)情況，并用單因素方差分析統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。結(jié)果：1.MV4-11細(xì)胞中mTOR、4E-BPl和p70S6K的磷酸化水平明顯增高，mTOR途徑被激活；2.10nmol/L-200nmol/L的雷帕霉素對(duì)攜帶FLT3-ITD突變

3、的白血病細(xì)胞具有明顯的生長(zhǎng)抑制作用，IC50為87.2nmol/L。影響其周期的分布，G0/G1細(xì)胞比例明顯上升(P﹤0.05)。10nmol/L-200nmol/L的雷帕霉素可明顯降低MV4-11細(xì)胞中p70S6K、4E-BP1的mRNA的水平，同時(shí)對(duì)4E-BP1、p70S6K的蛋白水平及磷酸化蛋白水平的下調(diào)也很明顯。較高濃度的雷帕霉素刺激后細(xì)胞24h后, mTOR、p-mTOR蛋白水平及mRNA水平均明顯降低（P＜0.05）。結(jié)論：