不同劑量胸腺肽-α1在腸毒素B(SEB)與內(nèi)毒素(LPS)復(fù)合誘導(dǎo)小鼠膿毒癥模型中的免疫干預(yù)作用研究.pdf

1、目的：膿毒癥（sepsis）的炎癥反應(yīng)/抗炎反應(yīng)失衡所造成的免疫功能紊亂是導(dǎo)致膿毒癥惡化的重要原因，針對(duì)膿毒癥的免疫治療也成為目前研究的熱點(diǎn)，但膿毒癥的免疫狀態(tài)在病程的早、中、晚期表現(xiàn)各異，機(jī)體對(duì)不同病原體的反應(yīng)模式也不盡相同，新的膿毒癥指南對(duì)免疫治療仍未有明確指向。
　　目前關(guān)于胸腺肽α1在膿毒癥中的免疫治療研究眾多，但胸腺肽α1的應(yīng)用時(shí)機(jī)、應(yīng)用劑量、療程等在學(xué)術(shù)界尚無(wú)定論。回顧過(guò)去，對(duì)胸腺肽α1在膿毒癥中的研究主要集中在由內(nèi)毒

2、素介導(dǎo)的嚴(yán)重膿毒癥模型。然而，膿毒癥患者中革蘭氏陽(yáng)性菌與革蘭氏陰性菌的復(fù)合感染大量存在，內(nèi)毒素與外毒素之間存在復(fù)雜的協(xié)同和交互作用，我們?cè)诓≡w復(fù)合感染情況下對(duì)胸腺肽α1的研究甚少；其次，任何免疫刺激治療都應(yīng)該考慮在某些情況下可能對(duì)機(jī)體造成潛在的有害影響，由于臨床中缺乏對(duì)免疫狀態(tài)及時(shí)又可靠的監(jiān)測(cè)手段，使得膿毒癥炎癥亢進(jìn)與免疫抑制的界限并不分明，輕癥者可能尚未發(fā)生免疫抑制，此種免疫狀態(tài)下應(yīng)用胸腺肽α1，對(duì)膿毒癥預(yù)后的影響如何？尚無(wú)可靠的循

3、證醫(yī)學(xué)依據(jù)。
　　本實(shí)驗(yàn)前期建立了腸毒素B（SEB）與內(nèi)毒素（LPS）復(fù)合攻擊小鼠膿毒癥模型，模擬革蘭氏陽(yáng)性球菌與革蘭氏陰性菌的復(fù)合感染，經(jīng)研究觀察屬于輕癥模型，目的是探討不同劑量胸腺肽-α1在腸毒素B（SEB）與內(nèi)毒素（LPS）復(fù)合攻擊小鼠輕癥膿毒癥模型中的免疫干預(yù)作用。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)首先建立金葡菌腸毒素B（SEB）與大腸桿菌內(nèi)毒素（LPS）復(fù)合感染小鼠膿毒癥模型，給BALb/c雄性小鼠腹腔注射SEB（500μg/kg

4、、400μg/kg、300μg/kg）2h后，注射LPS（1500μg/kg、1000μg/kg、500μg/kg），并設(shè)置PBS空白組，連續(xù)觀察所有小鼠72小時(shí)的存活情況及癥狀表現(xiàn)，每隔8小時(shí)記錄存活率。最終確定以300μg/kgSEB+1000μg/kgLPS建立了復(fù)合感染模型。接下來(lái)將90只小鼠完全隨機(jī)法平分成3組，每組30只，分別為對(duì)照組、小劑量組、大劑量組；再將每組小鼠隨機(jī)分為2h組、4h組、6h組，每組10只。將所有小鼠造模

5、后，給小劑量組小鼠腹部皮下注射胸腺肽-α1100ug/kg，大劑量組小鼠腹部皮下注射胸腺肽-α12000ug/kg，對(duì)照組小鼠腹部皮下注射等體積PBS液。觀察并記錄各組小鼠的癥狀，直至相應(yīng)的時(shí)間終點(diǎn)2h、4h、6h，采血后離心留取血清，解剖后留取肺臟等組織用來(lái)HE染色。并用ELISA法測(cè)定小鼠血清IL-6、IL-10、TNF-α濃度。所用數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±SD）表示，采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，正態(tài)性檢驗(yàn)后做方差分析，方差齊

6、的組間，用One-WayANOVA法，方差不齊的組間比較采用多個(gè)獨(dú)立樣本的秩和檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：
　　1、不同劑量胸腺肽-α1對(duì)小鼠血清IL-6濃度的影響
　　在給藥后2h，小劑量組、大劑量組與對(duì)照組相比，IL-6濃度明顯高于對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）,但小劑量組與大劑量組IL-6濃度相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在給藥后4h、6h，小劑量組、大劑量組與對(duì)照組相比，三者之間IL-6濃度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

7、P>0.05）。
　　2、不同劑量胸腺肽-α1對(duì)小鼠血清IL-10濃度的影響
　　在給藥后2h，小劑量組、大劑量組與對(duì)照組相比，IL-10濃度明顯低于對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但小劑量組與大劑量組IL-10濃度相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在給藥后4h、6h，小劑量組、大劑量組與對(duì)照組相比，三者之間IL-10濃度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　3、不同劑量胸腺肽-α1對(duì)小鼠血清IL-10/IL

8、-6比值的影響
　　在給藥后2h，小劑量組、大劑量組與對(duì)照組相比，IL-10/IL-6比值明顯低于對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但小劑量組與大劑量組IL-10/IL-6相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在給藥后4h、6h，小劑量組、大劑量組與對(duì)照組相比，三者之間IL-10/IL-6比值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　4、不同劑量胸腺肽-α1對(duì)小鼠血清TNF-α濃度的影響
　　在給藥后2h，小劑量組、大

9、劑量組與對(duì)照組相比，TNF-α濃度明顯低于對(duì)照組，而且小劑量組明顯低于大劑量組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；給藥后4h，小劑量組、大劑量組與對(duì)照組相比，TNF-α濃度明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），小劑量組與大劑量組之間相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；給藥后6h，小劑量組、大劑量組與對(duì)照組相比，TNF-α濃度明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），小劑量組與大劑量組之間相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05

10、）。
　　5、不同劑量胸腺肽-α1對(duì)小鼠臨床表現(xiàn)的影響
　　對(duì)照組小鼠在造模后4h內(nèi)均出現(xiàn)了立毛、呼吸急促、不飲食、腹瀉、精神萎靡、對(duì)周圍環(huán)境失去興趣、自潔行為消失，眼睛出現(xiàn)痂樣滲出等現(xiàn)象，直至觀察終點(diǎn)6h，癥狀仍無(wú)緩解。而小劑量組和大劑量組的小鼠與對(duì)照組相比，癥狀相對(duì)較輕，癥狀緩解出現(xiàn)較早：在用藥后4h內(nèi)，小劑量組與大劑量組小鼠呼吸急促、腹瀉的程度相對(duì)較輕；在用藥后5h～6h內(nèi)，小劑量組與大劑量組的大部分小鼠精神改善，活動(dòng)

11、增多，呼吸急促較前緩解，開始恢復(fù)自潔行為，個(gè)別小鼠出現(xiàn)飲食現(xiàn)象，對(duì)照組小鼠癥狀較前未見明顯緩解。小劑量組與大劑量組的小鼠臨床表現(xiàn)相似。
　　6、不同劑量胸腺肽-α1對(duì)小鼠臟器損害的組織病理學(xué)表現(xiàn)的影響
　　肺組織病理：對(duì)照組可見部分肺泡壁破壞、有肺間質(zhì)出血現(xiàn)象，小劑量組及大劑量組可見肺間質(zhì)血管充血擴(kuò)張，未見肺間質(zhì)出血；肝組織病理：對(duì)照組肝細(xì)胞水腫，顏色變淡，小劑量組及大劑量組病變較輕；腎病理：對(duì)照組腎間質(zhì)血管充血，小劑量組及