MALDI-TOF MS在血培養(yǎng)陽性標本微生物直接檢驗及碳青霉烯類耐藥性快速檢測中的應用研究.pdf

1、目的：利用基質輔助激光解析電離飛行時間質譜（MALDI-TOF MS）直接鑒定血培養(yǎng)陽性標本中微生物，并在此鑒定結果基礎上對血培養(yǎng)中常見細菌直接進行藥敏試驗，為臨床快速合理有效的抗血流感染治療提供依據(jù)。利用MALDI-TOF MS快速檢測耐碳青霉烯類腸桿菌科細菌（CRE）的厄他培南水解能力，為腸桿菌科細菌耐藥性的快速檢測提供新途徑。
　　方法：⑴對491例血培養(yǎng)陽性標本中微生物采用MALDI Sepsityper Kit試劑盒聯(lián)合

2、MALDI-TOF MS（簡稱MSK-質譜法）、分離膠聯(lián)合MALDI-TOF MS（簡稱分離膠-質譜法）進行直接鑒定，并同時對血培養(yǎng)陽性標本進行常規(guī)分離培養(yǎng)及鑒定（簡稱常規(guī)鑒定），結果不符的用基因測序予以確認；⑵基于分離膠-質譜法的鑒定結果，對236株血培養(yǎng)常見細菌同時進行K-B法直接藥敏試驗和K-B法常規(guī)藥敏試驗以及 MIC法直接藥敏試驗和MIC法常規(guī)藥敏試驗，分別比對直接藥敏試驗和常規(guī)藥敏試驗的結果；⑶利用MALDI-TOF MS對

3、108株CRE與9株碳青霉烯類敏感的腸桿菌科細菌進行厄他培南水解試驗。
　　結果：①與常規(guī)鑒定（或基因測序）結果比較，MSK-質譜法直接鑒定結果顯示，462例單株菌感染血培養(yǎng)的“種”水平符合率、“屬”水平符合率、未鑒定率和鑒定錯誤率分別為72.5％、76.0%、23.6%和0.4%，其中常見細菌的“種”水平符合率為71.0%~92.9%；29例復數(shù)菌感染血培養(yǎng)中，有7例兩種細菌均得以鑒定，15例鑒定出其中一種細菌，7例兩種細菌均未

4、鑒定出；MSK-質譜法鑒定時間約為40min/樣本。與常規(guī)鑒定（或基因測序）結果比較，分離膠-質譜法直接鑒定結果顯示，462例單株菌感染血培養(yǎng)的“種”水平符合率、“屬”水平符合率、未鑒定率和鑒定錯誤率分別為73.6%、77.3%、22.5%和0.2%，其中常見細菌的“種”水平符合率為78.6%~96.9%；29例復數(shù)菌感染血培養(yǎng)中，有4例兩種細菌均得以鑒定，18例鑒定出其中一種細菌，6例兩種細菌均未鑒定出，1例鑒定錯誤；分離膠-質譜法鑒

5、定時間約為15 min/樣本。②與K-B法常規(guī)藥敏試驗結果相比，革蘭陰性桿菌K-B法直接藥敏試驗結果的符合率、小誤差率和大誤差率分別為97.8%、1.4%和0.8%，革蘭陽性球菌分別為98.5%、0.9%和0.6%；與MIC法常規(guī)藥敏試驗結果相比，革蘭陰性桿菌MIC法直接藥敏試驗結果的符合率、小誤差率和大誤差率分別為98.0%、1.1%和0.9%，革蘭陽性球菌分別為98.4%、0.9%和0.7%。以血培養(yǎng)陽性報警為起始時間，至獲得直接藥

6、敏試驗結果大約需要24 h。③102株產碳青霉烯酶CRE的MALDI-TOF MS厄他培南水解試驗結果均為陽性，6株不產碳青霉烯酶CRE與9株碳青霉烯類敏感的腸桿菌科細菌的MALDI-TOF MS厄他培南水解試驗結果均為陰性，水解試驗大約需要2h。
　　結論：利用MALDI-TOF MS不僅可直接檢驗血培養(yǎng)陽性標本中微生物，也可快速檢測腸桿菌科細菌對碳青霉烯類耐藥性，具有快速、準確、經濟、有效等優(yōu)勢，值得在臨床微生物實驗室推廣應用