Let-7d在結核性腦膜炎患者腦脊液外泌體中表達的研究.pdf

1、背景與目的：
　　結核性腦膜炎（Tuberculoulous meningitis,TBM）是由結核分枝桿菌引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病，約占神經(jīng)系統(tǒng)結核病的70％左右。其目前診斷主要依靠腦脊液常規(guī)生化、細胞學檢查；然而在TBM發(fā)生的早期，腦脊液常規(guī)生化、細胞學變化多不典型，因此嚴重影響了TBM的早期診治，故探討TBM的潛在診斷標志物具有重大的臨床意義。
　　外泌體（exosomes）是一種由細胞主動分泌的大小均一，直徑約3

2、0~100nm的膜性囊泡小體，具有脂質雙分子層結構，廣泛存在于血液、尿液、唾液、腦脊液等體液中。其內含有多種蛋白質、mRNA、miRNA等，在不同細胞間進行信息傳遞，發(fā)生多種生物功能。外泌體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中參與正常的生理條件以及介導病理狀態(tài)，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的疾病的發(fā)生、發(fā)展及損傷修復中起著重要作用。
　　微小RNA（miRNA）是一類內源性非編碼的小分子單鏈RNA，其主要功能是從轉錄后水平調節(jié)基因的表達，廣泛參與多種生物的生命過程

3、。Let-7家族是miRNA重要的組成部分之一，其包含13個成員，其中l(wèi)et-7d在大腦中的表達水平非常高，在多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病中起著重要作用，可能成為某些疾病的潛在生物學標志物。
　　本研究通過分離臨床上常見的病毒性、化膿性、結核性腦膜炎患者以及正常對照者腦脊液中的外泌體，來探討let-7d在四種腦脊液外泌體中的表達水平，以尋求TBM新的潛在診斷標志物。
　　材料與方法：
　　隨機收集我院15例結核性腦膜炎患者（結腦組

4、，TBM組）、20例病毒性腦膜炎患者（病腦組，VM組）、10例化膿性腦膜炎患者（化腦組，PM組）以及20例正常腦脊液患者（對照組）的腦脊液。采取ExoQuick Precipitation提取法分離并純化外泌體。通過透射電鏡觀察其形態(tài)，采用實時定量 PCR法檢測其let-7d表達水平。
　　結果：
　　1.三種腦炎患者及正常人腦脊液中均發(fā)現(xiàn)外泌體，電鏡下呈圓形、橢圓形或茶托狀外形，直徑約30~100nm，實時定量PCR法檢測

5、發(fā)現(xiàn)其內含有不同程度表達水平的let-7d。
　　2.結核性腦膜炎患者腦脊液外泌體中l(wèi)et-7d的表達水平顯著低于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　3.let-7d表達水平在結腦組、化腦組與對照組相比均明顯下調，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；病腦組與對照組相比也下調，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　4.let-7d表達水平在化腦組與結腦組相比明顯下調，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。