梅山豬LBP基因的時(shí)空表達(dá)規(guī)律及其與核心啟動子區(qū)甲基化水平的關(guān)系.pdf

1、產(chǎn)腸毒素大腸桿菌F18(E.coliF18)是引起斷奶仔豬腹瀉的主要病原菌，目前研究發(fā)現(xiàn)，E.coli F18受體合成通路和炎癥免疫信號通路調(diào)控著斷奶仔豬E.coliF18的抗性。脂多糖結(jié)合蛋白(Lipopolysaccharide-binding protein，LBP)不僅能結(jié)合革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁主要成分脂多糖或內(nèi)毒素（Lipopolysaccharide，LPS）激活免疫信號通路，從而殺死病原菌進(jìn)而維護(hù)宿主內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)，而且血清中

2、高濃度LBP能中和LPS，降低LPS的生物學(xué)活性，因此LBP是體內(nèi)免疫防御機(jī)制中重要的組成部分。E.coli F18作為革蘭氏陰性菌，LPS也是其重要的致病因子。因此，LBP基因可能在斷奶仔豬E.coli F18抗性中發(fā)揮著重要的作用。本試驗(yàn)以梅山豬為試驗(yàn)材料，探究LBP基因在豬不同發(fā)育時(shí)期及不同組織中的表達(dá)規(guī)律，并探討豬LBP基因甲基化及其對基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制，為了解LBP基因功能及今后更好的將其應(yīng)用到豬抗病選育提供一定的試驗(yàn)依據(jù)和理

3、論基礎(chǔ)。
　　1.本試驗(yàn)利用Real-time PCR檢測了LBP基因在35日齡梅山豬中的組織表達(dá)譜（心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胃、肌肉、胸腺、腸系膜淋巴結(jié)、十二指腸、空腸和回腸等12個(gè)組織）;檢測了其在不同發(fā)育時(shí)期（1、7、14、21、28、35和158日齡）梅山豬肝臟組織中的表達(dá)規(guī)律;利用不同濃度的LPS誘導(dǎo)豬腸上皮細(xì)胞(IPEC-J2)，并分別在誘導(dǎo)后2h、4h和6h檢測LBP基因在IPEC-J2細(xì)胞系中的表達(dá)。結(jié)果表明

4、，LBP基因在肝臟組織中的表達(dá)極顯著高于其他組織(P＜0.01)，在十二指腸組織中的表達(dá)水平顯著高于除肝臟組織外的其他組織(P＜0.05);除肝臟和十二指腸組織外，其他組織中LBP基因的表達(dá)水平較低且無顯著性差異(P＞0.05);LBP在1和21日齡肝臟組織中的表達(dá)極顯著高于7、14、28和35日齡(P＜0.01)，158日齡肝臟組織中的LBP表達(dá)極顯著高于28和35日齡(P＜0.01)，顯著高于7和14日齡(P＜0.05);不同濃度的

5、LPS(0.1μg/mL、0.5μg/mL和1μg/mL)誘導(dǎo)IPEC-J2細(xì)胞系后，各濃度LPS誘導(dǎo)后LBP的表達(dá)并未呈現(xiàn)一致的表達(dá)規(guī)律。本試驗(yàn)推測，豬LBP基因主要高度表達(dá)于肝臟組織中;腸道組織中一定程度也可合成分泌LBP;當(dāng)仔豬受到外界病原菌或病原相關(guān)分子(Pathogen-associated molecular pattern，PAMP)侵染時(shí)，LBP基因的表達(dá)也會隨之發(fā)生變化;腸上皮細(xì)胞可能并不是腸道組織中主要分泌和合成LB

6、P蛋白的細(xì)胞系。
　　2.本試驗(yàn)利用BDGP軟件預(yù)測分析豬LBP基因核心啟動子區(qū)，并基于預(yù)測結(jié)果設(shè)計(jì)缺失片段，利用雙熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)檢測各片段的啟動子活性。結(jié)果表明，梅山豬LBP基因啟動子區(qū)段的-500～-206 bp為核心啟動子區(qū);-1500～-500 bp為調(diào)控豬LBP基因啟動子活性的重要區(qū)段。
　　3.本試驗(yàn)利用焦磷酸測序技術(shù)檢測豬LBP基因核心啟動子區(qū)的甲基化水平，其中在梅山豬不同組織中CpG2和CpG3位點(diǎn)的甲