淋巴瘤中RASSF5A基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)與mRNA表達的研究.pdf

1、目的:淋巴瘤是十大惡性腫瘤之一，在每年新診斷的血液系統(tǒng)腫瘤中約占一半，且發(fā)病率每年呈上升趨勢。按細(xì)胞來源淋巴瘤分為B細(xì)胞淋巴瘤和T細(xì)胞淋巴瘤，B細(xì)胞淋巴瘤中以彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤最為多見。淋巴瘤起病的癥狀較為多樣，多以無痛性進行性淋巴結(jié)腫大、局部腫塊及相應(yīng)器官壓迫癥狀為最初表現(xiàn)，侵襲性較高的類型淋巴瘤進展迅速，一部分經(jīng)聯(lián)合化療可持續(xù)緩解，但多數(shù)患者的治療療效不佳，預(yù)后較差。因此關(guān)注淋巴瘤病因?qū)W研究、早期診斷及靶向治療十分必要。
　　

2、隨著對腫瘤研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)除了基因突變外，表觀遺傳學(xué)機制在腫瘤的發(fā)生及發(fā)展中也起著重要的作用。DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)重要的組成部分，且DNA甲基化具有可逆性的特點，所以DNA甲基化是目前腫瘤相關(guān)研究中的熱點。RASSF5(也叫NORE1或RAPL)，是Ras相關(guān)區(qū)域家族(RASSF1-RASSF10)成員之一，位于染色體1q32.1。由于選擇性剪切和啟動子的不同，RASSF5分為RASSF5A、RASSF5B和RASSF5C三種不

3、同的轉(zhuǎn)錄本。目前已知RASSF5A和RASSF5C轉(zhuǎn)錄本具有生物學(xué)功能，也分別被叫做NORE1A和NORE1B(或RAPL)，兩者共享著相同的RA和SARAH域，不同的是RASSF5A攜帶著RASSF5C所沒有的C1結(jié)構(gòu)域。其中RASSF5A在腫瘤中的研究較為深入。本研究通過應(yīng)用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(Methylation-Specific PCR，MSP)和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse Transcriptase-PCR，

4、RT-PCR)的方法探討淋巴瘤患者和正常人外周血中RASSF5A基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)與mRNA表達水平，并研究它們與臨床資料之間的關(guān)系，為淋巴瘤的發(fā)病機制、臨床診斷及治療提供一定的理論依據(jù)。
　　方法:
　　1、應(yīng)用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(Methylation-Specific PCR，MSP)方法檢測彌漫大B細(xì)胞型淋巴瘤、T細(xì)胞淋巴瘤患者和正常人外周血中RASSF5A基因甲基化狀態(tài)，并分析RASSF5A基因甲基化與臨

5、床資料之間的關(guān)系。
　　2、應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse Transcriptase-PCR，RT-PCR)方法檢測彌漫大B細(xì)胞型淋巴瘤、T細(xì)胞淋巴瘤患者和正常人外周血中的RASSF5A基因mRNA的相對表達，并分析RASSF5A基因mRNA表達與臨床資料之間的關(guān)系。
　　3、應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS19.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果:
　　1、彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者外周血中RASSF5A基因的甲基

6、化及表達。
　　1.1彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者外周血中RASSF5A基因的甲基化
　　RASSF5A基因在彌漫大B細(xì)胞型淋巴瘤中的甲基化率為64.9％(48/74)，明顯高于正常人中的甲基化率7.1％(3/42)(P＜0.05)。
　　RASSF5A基因在彌漫大B細(xì)胞型淋巴瘤中的甲基化與患者的LDH、IPI評分及Ki-67相關(guān)(P＜0.05);與患者的性別、年齡、骨髓與結(jié)外累計與否、A/B癥狀、臨床分期、生發(fā)中心或非生發(fā)

7、中心、β2微球蛋白均無關(guān)(P＞0.05)。
　　1.2彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者外周血中RASSF5A基因的mRNA表達
　　RASSF5A基因在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中的mRNA表達量為0.54±0.17，低于正常人mRNA的表達量0.86±0.10(P＜0.05)。
　　RASSF5A基因在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中mRNA的表達量與患者的IPI評分及結(jié)外累計相關(guān)(P＜0.05);與患者的性別、年齡、骨髓累計與否、A/B癥狀、臨

8、床分期、生發(fā)中心或非生發(fā)中心、LDH、β2微球蛋白、Ki-67均無關(guān)（P＞0.05）。
　　1.3彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中RASSF5A基因甲基化狀態(tài)與其mRNA表達之間的關(guān)系
　　彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中RASSF5A基因啟動子甲基化陽性，其mRNA相對表達量平均為0.51±0.18，甲基化陰性的mRNA相對表達量平均為0.60±0.17，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2、T細(xì)胞淋巴瘤患者外周血中RASSF5A

9、基因的甲基化及表達。
　　2.1 T細(xì)胞淋巴瘤患者外周血中RASSF5A基因的甲基化
　　RASSF5A基因在T細(xì)胞型淋巴瘤中的甲基化率為73.8％(31/42)，明顯高于正常人外周血中的甲基化率7.1％(3/42)(P＜0.05)。
　　RASSF5A基因在T細(xì)胞型淋巴瘤中的甲基化與患者的臨床分期、結(jié)外累及及Ki-67相關(guān)（P＜0.05）;與患者的性別、年齡、骨髓累計與否、A/B癥狀、LDH評分、β2微球蛋白均無關(guān)(

10、P＞0.05)。
　　2.2 T細(xì)胞淋巴瘤患者外周血中RASSF5A基因的mRNA表達
　　RASSF5A基因在T細(xì)胞淋巴瘤中的mRNA表達量為0.52±0.18，低于正常人mRNA的表達量0.86±0.10(P＜0.05)。
　　RASSF5A基因在T細(xì)胞淋巴瘤中mRNA的表達量與患者的臨床分期、結(jié)外累及相關(guān)(P＜0.05);與患者的性別、年齡、骨髓累計與否、A/B癥狀、LDH、β2微球蛋白、Ki-67均無關(guān)(P＞0

11、.05）。
　　2.3 T細(xì)胞淋巴瘤中RASSF5A基因甲基化狀態(tài)與其mRNA表達之間的關(guān)系
　　T細(xì)胞淋巴瘤中RASSF5A基因啟動子甲基化陽性，其mRNA相對表達量平均為0.50±0.15，甲基化陰性的mRNA相對表達量平均為0.63±0.12，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤和T細(xì)胞淋巴瘤患者外周血中RASSF5A基因啟動子甲基化狀態(tài)明顯高于正常人，提示RASS

12、F5A基因啟動子甲基化可能是彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤和T細(xì)胞淋巴瘤發(fā)生的機制之一。
　　2、彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤和T細(xì)胞淋巴瘤患者外周血中RASSF5A基因mRNA的表達明顯低于正常人，提示RASSF5A基因可能在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤和T細(xì)胞淋巴瘤中主要起抑癌基因的作用。
　　3、彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤和T細(xì)胞淋巴瘤患者外周血中RASSF5A基因啟動子呈高甲基化，而其mRNA表達呈降低的狀態(tài)，提示RASSF5A基因甲基化可能是導(dǎo)致彌漫大B