2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究有效菌株發(fā)酵物、宿主水煎液、總黃酮、總皂苷對金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、大腸桿菌的抑菌活性,并比較有效菌株與宿主間的抑菌活性差異,為解決甘草野生資源匱乏和尋找甘草藥效成分替代品提供理論依據(jù)。
  方法:1.采用劃線法和五點法分別用NA和PDA培養(yǎng)基分離甘草內(nèi)生細(xì)菌和真菌,通過菌餅法篩選對金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、大腸桿菌具有抑菌作用的甘草內(nèi)生菌。
  2.采用超聲提取的方法,以提取溫度、提取時間、料液比、乙醇濃度

2、為考察因素,分別以總黃酮和總皂苷含量作為評價指標(biāo),采用L9(34)正交試驗設(shè)計,分別優(yōu)選出野生及栽培甘草總黃酮及總皂苷的最佳提取工藝。
  3.通過測定各甘草內(nèi)生菌有效菌株發(fā)酵物、宿主水煎液、總黃酮、總皂苷的抑菌圈直徑和采用二倍稀釋法測定其最小抑菌濃度(MIC),比較甘草內(nèi)生菌有效菌株與宿主水煎液、總黃酮、總皂苷間的體外抑菌活性差異。
  4.通過給小鼠灌胃給藥20株甘草內(nèi)生菌有效菌株發(fā)酵物、甘草水煎液、總黃酮、總皂苷,4d

3、后腹腔注射金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌和大腸桿菌菌懸液,觀察甘草內(nèi)生菌有效菌株發(fā)酵物、宿主水煎液、總黃酮、總皂苷對感染小鼠的保護作用,比較甘草內(nèi)生菌有效菌株與宿主水煎液、總黃酮、總皂苷間的體內(nèi)抑菌活性差異。
  結(jié)果:1.內(nèi)生菌的分離及有效菌株的篩選:野生甘草中分離出了63株內(nèi)生菌,其中內(nèi)生細(xì)菌31株(JTYB001~JTYB031),內(nèi)生真菌32株(JTYF001~JTYF032);栽培甘草中分離出了77株內(nèi)生菌,其中內(nèi)生細(xì)菌63

4、株(JTZB001~JTZB063),內(nèi)生真菌14株(JTZF001~JTYF014)。通過菌餅法,從分離到的140株內(nèi)生菌中初步篩選出20株具有抑菌活性的有效菌株,其中對金黃色葡萄球菌有抑制作用的內(nèi)生菌有18株:JTYB006、029,JTYF023,JTZB002、005、006、014、016、018、020、043、054、058、059、060、062、063,JTZF011;對肺炎鏈球菌有抑制作用的內(nèi)生菌有3株:JTZB00

5、5、043,JTZF014;對大腸桿菌有抑制作用的內(nèi)生菌有3株:JTYB012,JTZB018、020。
  2.甘草總黃酮提取工藝研究:(1)甘草總黃酮:B提取時間>A提取溫度>C乙醇濃度>D料液比,四個因素都有顯著性意義,最佳提取工藝為B3A3C2D1;(2)甘草總皂苷:A提取溫度>C乙醇濃度>D料液比>B提取時間,A提取溫度、C乙醇濃度和D料液比有顯著性意義,最佳提取工藝為A2C3D1B2;
  3.體外抑菌實驗:各組

6、對金黃色葡萄球菌均有抑菌活性(P<0.01),各有效菌株抑菌活性均弱于宿主;有效菌株中JTZB059、JTYB029抑菌活性相對較強,最小抑菌濃度分別為0.1250 g/mL、0.0625 g/mL;宿主中野生、栽培甘草總黃酮抑菌活性相對較強。各組對肺炎鏈球菌均有抑菌活性(P<0.01);與栽培甘草水煎液、總皂苷比較,JTZB005抑菌活性較強(P<0.01),最小抑菌濃度0.0625 g/mL;有效菌株中JTZB005抑菌活性相對較強

7、,宿主中栽培甘草總黃酮抑菌活性相對較強。各組對大腸桿菌均有抑菌活性(P<0.01);與栽培甘草水煎液、總黃酮比較,JTZB018抑菌活性較強(P<0.01),最小抑菌濃度0.1250g/mL;有效菌株中JTZB018抑菌活性相對較強,宿主中野生、栽培甘草總黃酮抑菌活性相對較強。
  4.體內(nèi)抑菌實驗:對感染金黃色葡萄球菌小鼠的影響,JTYB029和JTZB002、005、006、014、020、043、058、060、063及各水

8、煎液、各總黃酮、各總皂苷具有保護作用(P<0.05或P<0.01);TYB029和JTZB002、005、006、058及各水煎液、各總黃酮、各總皂苷平均存活時間3天(P<0.01);JTZB014、020、043、060、063平均存活時間2天(P<0.05或P<0.01)。對感染肺炎鏈球菌小鼠的影響,JTZB005、043、各水煎液、各總黃酮、各總皂苷均有保護作用(P<0.05或P<0.01);JTZB005、野生甘草水煎液、各總黃

9、酮、各總皂苷平均存活時間3天(P<0.01);JTZB043、栽培甘草水煎液平均存活時間2天(P<0.01)。有效菌株發(fā)酵物對感染大腸桿菌小鼠無保護作用。
  結(jié)論:1.從野生甘草中分離出了63株內(nèi)生菌,從栽培甘草中分離出了77株內(nèi)生菌,說明甘草內(nèi)生菌具有自身種類多樣性。
  2.超聲提取結(jié)合正交試驗設(shè)計用于總黃酮、總皂苷的提取,該工藝簡單、方便、快捷。
  3.部分甘草內(nèi)生菌具有與宿主相同或相似的抑菌活性。
 

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