醇脫氫酶的催化性質(zhì)和應(yīng)用研究.pdf

1、醇脫氫酶(ADH)是含鋅金屬酶，存在于動物、植物及微生物細(xì)胞中，催化生物體內(nèi)伯醇的氧化和醛的還原。在醫(yī)學(xué)分析上，為診斷肝細(xì)胞壞死的特異性指標(biāo)。近年來，隨著有機(jī)相催化和膜反應(yīng)器的發(fā)展，該酶的應(yīng)用研究非常活躍。主要包括以下幾個方面：作為生物傳感器用于分析乙醇濃度；作為催化劑用于化工中生產(chǎn)原料及中間反應(yīng)物；作為實(shí)驗(yàn)材料用于酶固定化、新型解酒劑等。因此，ADH已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)之一而應(yīng)用于醫(yī)學(xué)分析和工業(yè)生產(chǎn)等方面。
　　 本論文分為四個部

2、分。第一章概述了ADH所受抑制作用的機(jī)理，乙醇的定量分析方法及固定化酶的理論知識和應(yīng)用研究。
　　 第二章探討了抑制劑對ADH催化反應(yīng)的影響。基于ADH催化乙醇和氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的反應(yīng)，在最佳酶反應(yīng)條件下，研究了Cd2+和SCN-1對酶催化的抑制作用。通過加入金屬離子絡(luò)合劑乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)進(jìn)行了干擾消除實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明可有效的消除一定濃度的Cd2+對ADH酶促反應(yīng)的干擾?？疾炝薈d2+和SCN-1對

3、ADH熒光光譜的影響，發(fā)現(xiàn)其對ADH有熒光靜態(tài)猝滅現(xiàn)象。用同步熒光技術(shù)研究了Cd2+和SCN-1與ADH的相互作用。
　　 第三章研究了酶催化動力學(xué)熒光法測定乙醇，利用ADH催化乙醇和NAD的反應(yīng): C2H5OH + NAD →CH3CHO + NADH，通過測定還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)熒光強(qiáng)度的變化率得出其酶促反應(yīng)速度，對應(yīng)系列乙醇溶液制得標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而可測定試樣中的乙醇含量，用該法測定了小牛血清和飲料中的乙醇，

4、結(jié)果滿意。
　　 第四章研究了殼聚糖固定化ADH的制備及酶學(xué)性質(zhì)。以殼聚糖微球作為載體，戊二醛作為交聯(lián)劑，通過共價結(jié)合對ADH進(jìn)行固定化。討論了戊二醛濃度，聯(lián)酶時間，pH值等對ADH固定化的影響。對游離及固定化ADH酶學(xué)性質(zhì)的研究表明，酶促反應(yīng)的最適pH分別為8.4和8.8，最適溫度分別為31℃和26℃，對乙醇的表觀米氏常數(shù)分別為28.2mmol/L和8.1mmol/L。與游離酶相比，固定化酶的熱穩(wěn)定性更佳，并具有較好的貯存穩(wěn)定