1、WAP抗菌肽的表達與功能研究2、家蠅proPO系統(tǒng)關鍵基因的鑒定與表達分析.pdf

1、無脊椎動物沒有獲得性免疫，只有先天性免疫，而先天性免疫包括細胞免疫和體液免疫，抗菌肽和proPO激活系統(tǒng)則是體液免疫的兩種重要組成成分，在昆蟲的免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用。本文主要研究了wap抗菌肽和proPO激活系統(tǒng)，對抗菌肽在真核生物體內(nèi)的功能以及體外表達進行了研究，對proPO激活系統(tǒng)中的關鍵基因進行了定位與分類，并對其表達模式進行了初步的探索。
　　本文利用果蠅這一遺傳背景清晰的真核生物，將外源wap基因?qū)牍夡w內(nèi)，構(gòu)建了U

2、AS-wap轉(zhuǎn)基因果蠅品系。并利用遺傳變異法對wap在UAS-wap轉(zhuǎn)基因果蠅品系中的染色體位置進行了基因定位，得到了wap分別插入在轉(zhuǎn)基因果蠅性染色體、第二染色體、第三染色體基因型的品系，將它們與actin-Gal4果蠅雜交，實現(xiàn)了wap基因在它們雜交后代果蠅中的過表達，通過QPCR檢測發(fā)現(xiàn)，wap基因在mRNA水平的表達量明顯高于對照，有的達100多倍。并對wap抗菌肽在轉(zhuǎn)基因果蠅體內(nèi)的抗菌功能進行了探究與驗證，并獲得了明確的抗菌效

3、果。該結(jié)果為新型抗菌藥物的研發(fā)奠定了良好的基礎。
　　隨著大家對抗菌肽的重視程度越來越高，已經(jīng)有人用原核表達系統(tǒng)在體外成功的獲得了WAP重組蛋白，并且測得其有明顯的抗菌活性，但是WAP抗菌肽在真核表達系統(tǒng)的體外表達還未曾有人成功。本文對WAP抗菌肽在真核表達系統(tǒng)的表達做了研究，成功的構(gòu)建了wap/pPIC9K重組表達載體，獲得了含有wap/pPIC9K重組質(zhì)粒的真核表達菌株。另外針對目前原核表達獲得的WAP抗菌肽都是以包涵體形式存

4、在的、不利于WAP生物活性的發(fā)揮及利用這一技術難題，我們想要找到一種可以高產(chǎn)量的獲得可溶性WAP的方法，因此本實驗室進行了WAP的原核表達。構(gòu)建wap/pET32a/Rosetta重組表達菌株，通過體外誘導表達，獲得了可溶性的 WAP抗菌肽重組蛋白。獲得可溶性的 WAP抗菌肽是一大技術上的突破，同時也為WAP抗菌肽早日實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)奠定了技術基礎。
　　同時體液免疫中的另一大免疫因子 proPO激活系統(tǒng)的研究也逐漸引起了科學界的重

5、視，目前國內(nèi)外對proPO激活系統(tǒng)的全部成分都還不清楚，本實驗室著重研究了proPO激活系統(tǒng)中的幾個關鍵基因：酚氧化酶原(proPO)、激活酶(PAP)、抑制因子(Serpin)、受體因子(PGRP)。對這些關鍵基因進行了鑒定與分類，并對其表達模式進行了初步的分析。
　　本文通過轉(zhuǎn)錄組測序、序列分析與基因克隆技術，篩選出家蠅Serpins類、PAP類基因的Unigeen，并對其進行序列拼接、驗證、分析和結(jié)構(gòu)與功能預測，初步將Ser