產(chǎn)NDM-1多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥機(jī)制及流行特性研究.pdf

1、目的：
　　 研究溫州地區(qū)臨床分離的產(chǎn)新德里金屬β內(nèi)酰胺酶-1(New Delhimetallo-beta-laetamase-1，NDM-1)多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥機(jī)制及其流行特性，為臨床抗感染治療、院內(nèi)感染管理與控制提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.回顧性研究2005年1月～2010年12月間溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院、溫州醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院、溫州市二醫(yī)院、溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院臨床分離鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥

2、情況;
　　 2.產(chǎn)NDM-1菌株檢測(cè):通過PCR擴(kuò)增并測(cè)序研究菌株中blaNDM-1基因，確定產(chǎn)NDM-1菌株;
　　 3.產(chǎn)NDM-1菌株耐藥表型及耐藥性研究:通過CHROMagar ESBLs顯色瓊脂、改良Hodge試驗(yàn)和EDTA增效實(shí)驗(yàn)檢測(cè)產(chǎn)NDM-1菌株的耐藥表型;通過瓊脂稀釋法測(cè)定產(chǎn)NDM-1菌株對(duì)頭孢菌素類、碳青霉烯類、單β-內(nèi)酰胺環(huán)類、氟喹諾酮類、氨基糖苷類、四環(huán)素類和多黏菌素類抗菌藥物的最低抑菌濃度;<

3、br>　　 4.耐藥基因攜帶情況研究:通過PCR擴(kuò)增并測(cè)序上述產(chǎn)NDM-1菌株中編碼廣譜及超廣譜β內(nèi)酰胺類酶、A類碳青霉烯酶、B類碳青霉烯酶、D類碳青霉烯酶、頭孢菌素酶、16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷類修飾酶和四環(huán)素外排泵相關(guān)基因;
　　 5.耐藥基因水平轉(zhuǎn)移研究:通過接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)研究產(chǎn)NDM-1菌株所攜帶的耐藥基因水平轉(zhuǎn)移情況;通過構(gòu)建不同溫度條件研究溫度因素對(duì)blaNDM-1基因轉(zhuǎn)移效率的影響;通過對(duì)接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)中獲取

4、的陽性接合子研究blaNDM-1基因的穩(wěn)定性;
　　 6.菌株流行性研究:回顧性調(diào)查產(chǎn)NDM-1陽性菌株來源病人的臨床資料，研究患者住院期間的接觸可能性;通過脈沖場(chǎng)凝膠電泳分析與產(chǎn)NDM-1菌株同年度同病區(qū)分離鮑曼不動(dòng)桿菌的同源性，研究攜帶有blaNDM-1鮑曼不動(dòng)桿菌菌株在院內(nèi)的流行特性;通過多位點(diǎn)序列分型分析對(duì)攜帶blaNDM-1鮑曼不動(dòng)桿菌菌株進(jìn)行分型研究，同時(shí)與Pubmlst數(shù)據(jù)庫(kù)已報(bào)道菌株進(jìn)行對(duì)比分析，了解本研究中產(chǎn)b

5、laNDM-1鮑曼不動(dòng)桿菌菌株與全球流行株的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：
　　 1.2005年～2010年間溫州四家醫(yī)院臨床分離756株鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)第三代頭孢菌素類、碳青霉烯類、氟喹諾酮類抗菌藥物均具有較高的不敏感性;
　　 2.檢出產(chǎn)NDM-1陽性鮑曼不動(dòng)桿菌2株，均為溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院臨床分離株（菌株編號(hào)為B2214和B2226），CHROMagar ESBLs顯色瓊脂檢測(cè)為陰性、改良Hodge試驗(yàn)和EDTA

6、增效實(shí)驗(yàn)檢測(cè)均為陽性;
　　 3.產(chǎn)NDM-1鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)第三代頭孢菌素類抗生素、碳青霉烯類抗生素、單β-內(nèi)酰胺環(huán)類抗生素、四環(huán)素類抗生素和慶大霉素高度耐藥，而對(duì)氟喹諾酮類抗菌藥物、多黏菌素類抗生素以及妥布霉素敏感;
　　 4.PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)2株產(chǎn)NDM-1鮑曼不動(dòng)桿菌同時(shí)攜帶有blaIMP-1、blaOXA-23-like、blaOXA-51-like、blaADC、tetA和tetB基因;
　　 5.接合轉(zhuǎn)

7、移實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)blaNDM-1及tetA可通過接合轉(zhuǎn)移的方式從原始菌株轉(zhuǎn)移至大腸桿菌J53受體菌中（接合子命名為J-B2214和J-B2226），同時(shí)菌株的接合轉(zhuǎn)移效率受溫度影響，在37℃條件下的轉(zhuǎn)移效率較高，所獲得的接合子在無抗生素的條件下極不穩(wěn)定，易丟失耐藥基因;
　　 6.臨床資料回顧發(fā)現(xiàn)B2214和B2226菌株的攜帶者在住院期間可能存在接觸史，脈沖場(chǎng)電泳分析發(fā)現(xiàn)B2214和B2226為同一克隆型，同時(shí)多序列位點(diǎn)分型分析發(fā)現(xiàn)

8、B2214和B2226均屬于首次發(fā)現(xiàn)的ST435型鮑曼不動(dòng)桿菌;
　　 結(jié)論：
　　 1.本研究中2005年～2010年間溫州地區(qū)臨床分離鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)多種抗菌藥物耐藥情況嚴(yán)重;
　　 2.攜帶多種耐藥相關(guān)基因是本研究中產(chǎn)NDM-1多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌屬對(duì)多種抗菌藥物高度耐藥的主要原因;
　　 3.本研究中的2株產(chǎn)NDM-1鮑曼不動(dòng)桿菌為同一克隆型且屬于首次發(fā)現(xiàn)的ST435型，菌株間存在克隆傳播的可能;<