基于分子印跡技術(shù)對(duì)苦參堿的分離及其衍生物的藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、山豆根富含生物堿、皂苷、黃酮和多糖等成分，主要分布于我國(guó)廣西壯族自治區(qū)的西南部至西北部，因其具有清熱解毒、消腫止痛、抗炎、抗腫瘤等藥理活性受到廣泛的關(guān)注。其中以苦參堿(MT)為代表的喹諾里西啶(Quinolizidine)類生物堿，包括MT、氧化苦參堿(OMT)、槐果堿(SC)和氧化槐果堿(OSC)等為山豆根藥材的主要活性成分，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、抗病毒、抗炎、抗腫瘤等方面具有重要的藥理活性和應(yīng)用前景。
　　對(duì)MT的測(cè)定、

2、提取工藝及其衍生物的藥物代謝規(guī)律進(jìn)行探索研究，可為藥材的質(zhì)量控制，MT單體的獲取，以及以MT為先導(dǎo)化合物的結(jié)構(gòu)修飾提供科學(xué)依據(jù)。本文以廣西盛產(chǎn)藥材山豆根為研究對(duì)象，采用三重四級(jí)桿液質(zhì)聯(lián)用儀對(duì)其生物堿含量進(jìn)行測(cè)定，建立藥材中總MT的含量測(cè)定方法。制備熱敏型分子印跡聚合物，并將其作為吸附劑應(yīng)用于MT的提取分離過(guò)程中。將MT和4個(gè)活性較高的MT衍生物進(jìn)行大鼠肝微粒體孵化實(shí)驗(yàn)及藥代動(dòng)力學(xué)研究，探索藥物活性與體內(nèi)過(guò)程的關(guān)系。
　　本文獲得以

3、下幾個(gè)方面主要結(jié)果:
　　(1)實(shí)驗(yàn)運(yùn)用HPLC MS/MS聯(lián)用技術(shù)分析測(cè)定了山豆根中MT型生物堿含量，包括MT、SC、OSC和OMT，結(jié)果表明山豆根中的MT型生物堿普遍以O(shè)MT形式存在，占4者總量的61.68％～80.83％，MT的量與OSC量相當(dāng)，分別占8.16％～19.39％和9.86％～23.36％，此外還含有少量SC，含量小于1.15％。
　　(2)實(shí)驗(yàn)首次建立了以50％乙醇作為媒介，采用添加還原劑的HPLC含量測(cè)

4、定方法，以總MT作為指標(biāo)，利用反相色譜柱進(jìn)行快速的測(cè)定，出峰時(shí)間約為6.5 min，結(jié)果顯示，其總MT的含量與原藥典測(cè)定方法中MT與OMT總量相比，增加了0.08～0.29％，且與LCMS測(cè)定的4種生物堿之和基本相符，可為藥材質(zhì)量控制以及提取工藝提供參考。
　　(3)首次制備了熱敏型MT分子印跡聚合物，結(jié)果顯示熱敏單體N-異丙基丙烯酰胺與交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯比例為1∶1時(shí)，聚合物具有較好的特異性吸附，其低臨界相轉(zhuǎn)變溫度在35

5、～40℃之間;將其與提取提取耦合可以保持提取過(guò)程中藥材與提取液中MT的濃度差，提高M(jìn)T溶出效率;對(duì)添加熱敏型分子印跡聚合物作為吸附劑前后的MT溶出曲線進(jìn)行擬合，以Weibull及Logistic模型對(duì)溶出曲線進(jìn)行分析，結(jié)果說(shuō)明以熱敏型分子印跡聚合物可顯著提高藥材溶出效率，增加最大飽和溶出量，即針對(duì)目標(biāo)化合物的特異性吸附可以在提取過(guò)程中顯著提高提取效率;以不同溫度的水作為洗脫劑，通過(guò)程序洗脫步驟即可獲得純度89％以上的MT水溶液。

6、　　(4)對(duì)MT及4個(gè)衍生物進(jìn)行大鼠肝微粒體孵化實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明雙鍵與MT相連的14-噻吩基次亞甲基苦參堿（TMM）發(fā)生生物降解，并發(fā)現(xiàn)其降解產(chǎn)物MT;而單鍵與MT相連的14-(3-甲基芐基)苦參堿(3MBM)，14-(4-甲基芐基)苦參堿(4MBM)，14-(2-萘甲基)苦參堿（28＃）均未發(fā)生生物降解。
　　(5)以相同劑量的TMM和MT進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)研究，得出藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)顯示TMM在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為MT，且生物利用度高于MT，將M

7、T的半衰期從7.80 h延長(zhǎng)至18.84 h。4個(gè)MT衍生物中，只有TMM在體內(nèi)代謝為MT，說(shuō)明14-位上的雙鍵可使其進(jìn)行生物降解。
　　(6)以相同劑量的3MBM及4MBM進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)研究，結(jié)果二者血藥濃度特征相似，說(shuō)明其體內(nèi)代謝過(guò)程相同。結(jié)合藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以認(rèn)為3MBM14-位芐基苯環(huán)上間位的取代，可提高其抗腫瘤活性。
　　(7)大鼠肝微粒體孵化實(shí)驗(yàn)和藥代動(dòng)力學(xué)研究及藥理實(shí)驗(yàn)表明，隨著化合物脂水分配系數(shù)LogP增大，其