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1、本文對(duì)溶膠—凝膠法固定脂肪酶CALB(南極假絲酵母脂肪酶B)進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究,并通過(guò)添加保護(hù)劑和保護(hù)膜的方法對(duì)CALB分子進(jìn)行保護(hù)。 首先,在水解酶活檢測(cè)方法上對(duì)傳統(tǒng)的橄欖油水解法進(jìn)行改進(jìn),脂肪酶通過(guò)催化油酸乙酯乳化液水解生成游離油酸的量定義酶活,使用固定pH滴定法測(cè)定油酸量,使檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確。 其次,研究了固定化過(guò)程中水含量、緩沖溶液pH值、交聯(lián)劑、酶原溶液的量對(duì)固定化酶活的影響。在酶分子的保護(hù)處理中采用兩種途
2、徑,一、篩選具有保護(hù)效果的糖分子作為保護(hù)添加劑融入酶原溶液中;二、引入脂質(zhì)體膜,將酶原溶液在卵磷脂與膽固醇混合溶液中進(jìn)行保護(hù)預(yù)處理。并對(duì)固定化條件利用正交實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了五因素四水平的優(yōu)化,得出固定化酶制備的適宜條件為:1mg脂肪酶CALB溶于60μLH2O中,加入10mg木糖制備成酶原溶液,取80μL酶原溶液與500μL正癸烷溶液(溶有1.5%膽固醇,6%卵磷脂)混合,充分振蕩分散后,傾入600μL固定化載體前驅(qū)體溶液(含有聚乙二醇PEG4
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