23839.基于全基因合成技術(shù)的南極假絲酵母脂肪酶b基因的密碼子優(yōu)化研究_第1頁
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文檔簡介

1、華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文基于全基因合成技術(shù)的南極假絲酵母脂肪酶B基因的密碼子優(yōu)化研究姓名：劉立營申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：楊江科20110121II華中科中科技大學(xué)碩士學(xué)位論大學(xué)碩士學(xué)位論文CalBMHis10個(gè)重組表達(dá)質(zhì)粒，并分別轉(zhuǎn)至P.pastisGS115、SMD1168和X33，實(shí)現(xiàn)了各基因在宿主菌中的功能性表達(dá)，獲得了高效表達(dá)的基因工程菌。結(jié)果表明，密碼子優(yōu)化明顯提高了CalB在P.pastis中的水解酶活與蛋

2、白表達(dá)量，較原始基因提高40%了左右。以pPICZα為表達(dá)載體，X33為宿主菌株篩選到的轉(zhuǎn)化子表達(dá)水平最高，最高辛酸乙酯水解活力和最高總蛋白表達(dá)量分別為246.3UmL和179.1mgL。5.4.對(duì)經(jīng)NiNTA親和層析和超濾濃縮純化的CALB進(jìn)行SDSPAGE分析，發(fā)現(xiàn)在CalB基因在P.pastis中表達(dá)產(chǎn)物的大小為35kDa（含糖基化側(cè)鏈）。經(jīng)EndoH糖苷內(nèi)切酶酶切的CALB約為33kDa，與實(shí)際CALB大小一致，證實(shí)了CALB在

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