ERCC4基因啟動(dòng)子單倍型對(duì)轉(zhuǎn)錄調(diào)控影響的研究.pdf

1、肺癌是世界上最常見的腫瘤之一,在所有的惡性腫瘤中,肺癌的死亡率最高。吸煙引起的DNA損傷在肺癌的發(fā)生過(guò)程中起重要的作用。香煙中的多環(huán)芳烴、芳族胺、亞硝胺被認(rèn)為是引起機(jī)體形成DNA加合物的主要致癌物,積累的DNA加合物能增加DNA損傷的可能性,損傷的DNA會(huì)阻止DNA的復(fù)制和基因的轉(zhuǎn)錄,導(dǎo)致基因突變和腫癌的發(fā)生。NER(Nucleotide excision repair)是最通常的DNA修復(fù)途徑,是修復(fù)吸煙產(chǎn)生的DNA加合物的主要途徑。

2、所以不正常的DNA修復(fù)系統(tǒng)能增加基因組的不穩(wěn)定性以致引起基因的突變乃至肺癌的發(fā)生。 人ERCC4(Excision repair cross-complementing rodent repair deficiency,complementation group 4)IXPF (Xeroderma pigmentosum,complementationgroupF)位于16p13.3-13.13,它的編碼產(chǎn)物是NER途徑關(guān)鍵酶之

3、一,它與ERCCl蛋白形成復(fù)合物,不僅參與識(shí)別受損DNA,而且可以特異切割受損DNA片段的5'端。ERCC4基因缺陷能導(dǎo)致基因的不穩(wěn)定和引起致癌作用。已有的研究顯示在中國(guó)人群中(n=1010)ERCC4啟動(dòng)子區(qū)-644C/T(rs3136038)多態(tài)性與肺癌的發(fā)生緊密關(guān)聯(lián)。為了闡明這種關(guān)聯(lián)的分子機(jī)制,我們研究了ERCC4基因的啟動(dòng)區(qū)多態(tài)與基因表達(dá)調(diào)控的關(guān)系。生物信息學(xué)分析與ERCC4啟動(dòng)區(qū)多態(tài)位點(diǎn)結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子,并用EMSA實(shí)驗(yàn)加以驗(yàn)證

4、和分析SNP多態(tài)是否影響轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合。 雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)顯示不同ERCC4啟動(dòng)子單倍型有不同的轉(zhuǎn)錄活性,在HELF細(xì)胞中,與其它單倍型啟動(dòng)子相比,野生大單倍型啟動(dòng)子-644C/-357A有較高的啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性。 熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明煙霧抽取物(CSE)能極大地抑制ERCC4基因的表達(dá)。在CSE條件下,細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明野生大單倍型-644C/-357A對(duì)CSE的損傷有較好的保護(hù)作用。 EMSA實(shí)驗(yàn)結(jié)

5、果表明CREB和CRE-BP1可能是結(jié)合在ERCC4啟動(dòng)子-644和-357位點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄因子,大單倍型-644C/-357A能增強(qiáng)與CREB和CRE-BP1的結(jié)合能力。 -644C/T(rs3136038)基因型與ERCC4表達(dá)水平研究結(jié)果顯示,與野生純合基因型相比,突變純合基因型攜帶者的外周血白細(xì)胞有較低的ERCC4表達(dá)水平。 我們的研究結(jié)果表明基因和環(huán)境因子共同調(diào)節(jié)ERCC4基因的表達(dá),我們推測(cè)ERCC4轉(zhuǎn)錄調(diào)控很可能