下丘腦LHA-ARC Orexin-A通路對胃牽張敏感神經(jīng)元放電活動和胃運動調(diào)控研究.pdf

1、目的：食欲素（orexin）是一種多功能神經(jīng)肽，主要分布于下丘腦，其在能量穩(wěn)態(tài)、獎勵、成癮和睡眠/覺醒等生理功能中發(fā)揮重要作用，也被視為調(diào)節(jié)攝食行為的一個重要的調(diào)質(zhì)。本文擬通過逆行追蹤結(jié)合熒光免疫組化方法，觀察大鼠下丘腦外側(cè)核（lateral hypothalamic area，LHA）-弓狀核（Arcuate nucleus，ARC）orexin神經(jīng)和功能通路構(gòu)成，通過神經(jīng)元細(xì)胞外放電記錄和在體胃運動，探討LHA-ARC orexin

2、-A通路對胃傳入信息以及胃運動的調(diào)控及機制。
　　方法：本研究采用成年雄性Wistar大鼠，通過①采用熒光金（FG）逆行追蹤結(jié)合熒光免疫組化方法，觀察LHA-ARC orexin-A神經(jīng)通路的構(gòu)成。②采用細(xì)胞外放電記錄方法，鑒定ARC orexin胃牽張敏感神經(jīng)元（Gastric distention sensitive neurons，GD），并探討ARC內(nèi)orexin-A對GD神經(jīng)元放電活動的影響及機制；采用電刺激LHA，觀察

3、ARC內(nèi)orexin-A敏感的GD神經(jīng)元放電活動改變，探討orexin-A在LHA-ARC通路中調(diào)控作用。③ARC微量注射orexin-A和及其受體阻斷劑SB334867，以及電刺激LHA，觀察大鼠胃收縮幅度和頻率的改變。
　　結(jié)果：
　?、贌晒饨穑‵G）逆行追蹤結(jié)合熒光免疫組化實驗結(jié)果顯示，ARC微量注射FG后1周，大鼠經(jīng)心灌注固定、腦冰凍切片，以及orexin-A免疫組化染色，在LHA可見FG/orexin雙重標(biāo)記的神經(jīng)

4、元，提示，LHA中orexin-A神經(jīng)元可發(fā)出纖維投射至ARC。
　?、诖笫驛RC共記錄到149個GD神經(jīng)元，其中GD-E神經(jīng)元91個，GD-I神經(jīng)元58個。ARC微量注射orexin-A，62個（62/91，68.1％）GD-E神經(jīng)元興奮性顯著增加，其放電頻率由4.27±0.58 Hz增加到8.46±0.95Hz（P<0.01）；39個（39/58，67.2%）GD-I神經(jīng)元興奮性也顯著增強，其放電頻率由4.02±0.53Hz增

5、加到5.43±0.57Hz（P<0.05）。然而，ARC給予大鼠orexin-A受體拮抗劑SB334867，再給予orexin-A，orexin-A興奮效應(yīng)完全被阻斷（P>0.05）。
　　③電刺激LHA，在ARC檢測到的62個orexin-A敏感GD-E神經(jīng)元中，有43個（43/62，69.4%）放電頻率由4.08±0.55Hz升高至9.04±1.03Hz，興奮顯著增強（P<0.01）；有11個（11/62，17.7%）放電活動

6、被抑制（2.01±0.43Hz，P<0.05），剩余8個（8/62，12.9%）神經(jīng)元放電活動則無明顯變化（3.97±0.58Hz，P>0.05）。在記錄到的39個orexin-A敏感GD-I神經(jīng)元中，26個（26/39，66.7%）也出現(xiàn)興奮反應(yīng)，放電頻率從3.87±0.51Hz升高8.13±0.94Hz（P<0.05），有8個（8/39，20.5%）神經(jīng)元被抑制（1.95±0.37Hz，P<0.05），5個（5/39，12.8%）神

7、經(jīng)元沒有變化（4.01±0.49Hz，P>0.05）。然而ARC預(yù)先注射orexin-A受體拮抗劑SB334867，可減弱LHA電刺激對ARC orexin-A敏感的GD神經(jīng)元的興奮效應(yīng)（4.23±0.53Hz，P<0.05）。
　?、芪高\動實驗結(jié)果顯示：在ARC注射不同濃度orexin-A，大約5min后，大鼠胃收縮幅度和頻率呈劑量依賴性增加（P<0.05～0.01）。ARC注射SB334867，可完全消除orexin-A對大鼠