版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、本課題研究利用金磁微球法提取得到擬南芥總RNA,然后利用RT-PCR法克隆出4CL(4CL)基因cDNA序列,構(gòu)建了其克隆載體Pgem-Easy-4CL。通過(guò)測(cè)序?qū)ζ溥M(jìn)行序列分析后,進(jìn)一步構(gòu)建其畢赤酵母表達(dá)載體pPIC3.5K.4CL,然后利用電擊法轉(zhuǎn)化畢赤酵母GSll5,經(jīng)甲醇誘導(dǎo)重組酵母表達(dá),取得了如下進(jìn)展: 利用RT-PCR法從擬南芥中擴(kuò)增出4-香豆酸:輔酶A連接酶基因編碼序列,構(gòu)建了克隆載體Pgem-TEasy-4CL。
2、通過(guò)PCR和酶切初步鑒定J下確后,對(duì)其進(jìn)行測(cè)序,測(cè)序結(jié)果和NCBI中登陸號(hào)為NM_001 084228.1的4CLcDNA序列比對(duì),同源性為99%。表明4-香豆酸:輔酶A連接酶基因已經(jīng)成功克隆并連接至克隆載體Pgem-Teasy中。 設(shè)計(jì)分別帶有BamtH和Not I兩個(gè)酶切位點(diǎn)的4-香豆酸:輔酶A連接酶基因引物,以Pgem-Teasy-4CL為模板,擴(kuò)增出5'端和3'端分別帶有BamHI和Not I兩酶切位點(diǎn)的4CL基因,然后
3、用這兩種酶切后連接至畢赤酵母表達(dá)載體pPlC3.5K中。重組表達(dá)載體Ppic3.5K.4CL。轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a并利用其上攜帶的氨芐青霉素抗性基因篩選出抗性菌株,然后做PCR及雙酶切鑒定。經(jīng)鑒定4-香豆酸:輔酶A連接酶基因已經(jīng)準(zhǔn)確地連接到畢赤酵母表達(dá)載體Ppic3.5K中。 用電轉(zhuǎn)化法將重組酵母表達(dá)載體Ppic3.5K-4CL,導(dǎo)入甲醇型酵母(P.Pastoris)菌株GSll5中,獲得轉(zhuǎn)化子。將轉(zhuǎn)化子采用營(yíng)養(yǎng)缺陷、遺傳霉素、
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 甜高粱4CL基因的克隆、鑒定、時(shí)空表達(dá)分析及其遺傳轉(zhuǎn)化探究.pdf
- 茶樹(shù)4CL基因的克隆及功能驗(yàn)證.pdf
- 農(nóng)桿菌介導(dǎo)慈竹4CL基因遺傳轉(zhuǎn)化梁山慈竹的研究.pdf
- 紫穗槐UGPase和4CL基因的克隆及在植物中的轉(zhuǎn)化與表達(dá).pdf
- 白樺再生體系的優(yōu)化及相關(guān)材質(zhì)改良基因4CL、UGPA、UGPase的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf
- 姜黃4CL和CURS基因的克隆與功能分析.pdf
- 香鱗毛蕨4CL基因家族的克隆及功能驗(yàn)證.pdf
- 大豆NAC4和NAC27基因的克隆及其對(duì)擬南芥和水稻的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf
- 紫花苜蓿MsPOD基因的克隆及對(duì)擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf
- 梁山慈竹離體培養(yǎng)體系及慈竹4CL基因遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf
- 擬南芥ADH2基因的克隆及其對(duì)煙草與菊花的遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf
- UGPase和反義4CL基因在煙草中的轉(zhuǎn)化及表達(dá)研究.pdf
- 金絲小棗和無(wú)核小棗4CL基因的克隆和表達(dá)研究.pdf
- 玉米部分ZmCBL基因的克隆及其轉(zhuǎn)化擬南芥.pdf
- 桑樹(shù)C4H、4CL及CHS基因克隆及其在不同桑種質(zhì)間的表達(dá)差異.pdf
- 慈竹和硬頭黃竹4CL基因及其上游序列克隆與表達(dá)載體構(gòu)建.pdf
- 芪合酶基因的克隆及其對(duì)甜瓜的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf
- 人Ⅲ型膠原蛋白基因的克隆及其對(duì)畢赤酵母的轉(zhuǎn)化.pdf
- 水稻APX基因的克隆及其對(duì)煙草的遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf
- 甜瓜幼果cDNA文庫(kù)的構(gòu)建、酸性轉(zhuǎn)化酶基因的克隆及遺傳轉(zhuǎn)化.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論