擬南芥 AB15 基因啟動子的克隆與遺傳轉(zhuǎn)化載體構(gòu)建.pdf

1、植物啟動子序列含有多種順勢作用元件，能在轉(zhuǎn)錄水平上參與調(diào)控下游基因相應(yīng)基因的表達(dá)過程，從而使植物能對外界環(huán)境做出響應(yīng)的調(diào)節(jié)，分析植物某一基因的啟動子，能為其下游基因激活表達(dá)的機(jī)理提供相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。脫落酸(abscisic acid，ABA)是植物體內(nèi)一種重要的激素，它不僅參與植物體內(nèi)多種生理過程，而且能調(diào)控植物細(xì)胞內(nèi)的新陳代謝，以此來調(diào)節(jié)植物適應(yīng)環(huán)境。ABI5(ABA insensitive5)是一個(gè)在種子和營養(yǎng)器官中響應(yīng)ABA信號的

2、亮氨酸拉鏈蛋白。它能激活一系列受ABA調(diào)控的基因的表達(dá)，在ABA信號傳遞、相關(guān)基因表達(dá)以及胚胎發(fā)育等方面起著重要的作用，以此來調(diào)節(jié)植物生長發(fā)育以及適應(yīng)各種變化的環(huán)境。
　　由于擬南芥全基因組已經(jīng)測序完成，本論文直接從NCBI基因數(shù)據(jù)庫中獲得擬南芥ABI5啟動子序列。通過對該段啟動子序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)該段序列中含有大量可能與根和花定位相關(guān)的序列以及大量響應(yīng)ABA信號、應(yīng)答干旱、鹽堿和光信號的順勢作用元件，這些可能的序列會對

3、ABI5基因的表達(dá)起到相應(yīng)的調(diào)控作用。而且在轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)之前的不翻譯區(qū)有一段782bp的內(nèi)含子序列，可能會對啟動子的轉(zhuǎn)錄活性造成影響。為了全面了解該啟動子序列調(diào)控下游基因表達(dá)的時(shí)空特異性，我們設(shè)計(jì)了一對能特異擴(kuò)增出包含整個(gè)ABI5基因啟動子區(qū)以及不翻譯區(qū)（包括內(nèi)含子）的引物，然后通過常規(guī)PCR擴(kuò)增得到了ABI5轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)(ATG)之前的1820bp片段，并進(jìn)行測序檢驗(yàn)。隨后將這段序列與經(jīng)過雙酶切的pCAMBIA1031質(zhì)粒構(gòu)建成ABI