牛角的形態(tài)發(fā)生及其真皮乳頭cDNA表達文庫的構(gòu)建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、牛角由額骨的骨質(zhì)突與特化的角質(zhì)外殼構(gòu)成,是皮膚的衍生物。角發(fā)生于胎牛額部角原基,資料顯示,角原基約在胚齡70~100天時出現(xiàn)。角原基的形態(tài)發(fā)生過程與其它皮膚衍生物相似,是上皮一間充質(zhì)相互作用的結(jié)果。研究牛角的形態(tài)發(fā)生及其信號調(diào)控,不僅可為發(fā)育生物學(xué)器官形態(tài)發(fā)生過程中,上皮.間充質(zhì)相互作用機理的研究提供新的模型,對毛囊生物學(xué)的研究也具有重要理論意義和參考價值。 本試驗研究材料為18頭胚齡E85-280d的公牛胚胎及五對2~3歲成年

2、公牛角。通過對胎牛角原基與成年牛角真皮進行組織切片HE染色、β-catenin的免疫組織化學(xué)以及構(gòu)建生長期牛角真皮乳頭cDNA表達文庫,初步研究了胎牛角原基的形態(tài)變化過程及成年牛角真皮結(jié)構(gòu)特點,檢測了β-catenin在各胚齡胎牛角原基中的表達,并對其在角原基形態(tài)發(fā)生過程中的作用進行了探討,為進一步研究真皮乳頭的功能基因在牛角形態(tài)發(fā)生中的作用也奠定了基礎(chǔ)。結(jié)果和結(jié)論如下: 1、組織切片HE染色結(jié)果表明:角原基表皮厚度隨胎齡增加逐

3、漸變薄,表皮細胞形態(tài)由規(guī)則向不規(guī)則過渡,毛囊發(fā)育較身體其它部位早,且體積較大。牛胚胎早期(E85~140d),角原基表皮平均厚度最大,基底層細胞為單層柱狀,其他細胞呈多邊形,細胞核質(zhì)比??;牛胚胎中期至中后期(E141~210d),表皮平均厚度逐漸減小,細胞體積亦減小,仍然呈多邊形,核質(zhì)比增大,大部分毛囊已發(fā)育成熟,毛干正在形成或已經(jīng)頂出皮膚;牛胚胎后期(E211~280d),表皮總厚度最薄,但角質(zhì)層增厚,細胞形狀不規(guī)則,表皮各層結(jié)構(gòu)界限

4、模糊。成年牛角真皮厚度由角根部向上逐漸變薄,到頂部又變厚,其表面有很多真皮乳頭,角基部的乳頭短而密,向上則逐漸變長變稀,至角頂部又變密。真皮乳頭緊緊嵌入角質(zhì)外殼內(nèi)層壁中。 2、β-catenin免疫組化研究表明:角原基β-catenin的表達隨胎齡的增加從表皮基底層細胞到所有表皮細胞,且陽性逐漸增強,毛囊持續(xù)表達β-catenin。牛胚胎早期,D.catenin在基底層細胞胞漿表達為陽性,其它表皮細胞膜表達呈陽性而胞漿為弱陽性,

5、毛囊隆突區(qū)、毛母質(zhì)和外根鞘均有表達;牛胚胎中期,β-catenin在所有表皮細胞胞漿及部分細胞核中為陽性,其表達持續(xù)存在于毛囊隆突區(qū)、毛母質(zhì)和外根鞘,且外根鞘表達增強;牛胚胎后期,β-catenin的表達為強陽性,毛囊結(jié)構(gòu)及其中β-catenin的表達均未發(fā)生明顯變化。 3、成功構(gòu)建了牛角真皮乳頭cDNA表達文庫,初級文庫的庫容量為6.07x10<'5>,重組率高達93%,擴增后,文庫滴度為4×10<'5>pfu/ml。根據(jù)美國

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