牛角的形態(tài)發(fā)生及其真皮乳頭cDNA表達(dá)文庫(kù)的構(gòu)建.pdf

1、牛角由額骨的骨質(zhì)突與特化的角質(zhì)外殼構(gòu)成，是皮膚的衍生物。角發(fā)生于胎牛額部角原基，資料顯示，角原基約在胚齡70～100天時(shí)出現(xiàn)。角原基的形態(tài)發(fā)生過(guò)程與其它皮膚衍生物相似，是上皮一間充質(zhì)相互作用的結(jié)果。研究牛角的形態(tài)發(fā)生及其信號(hào)調(diào)控，不僅可為發(fā)育生物學(xué)器官形態(tài)發(fā)生過(guò)程中，上皮．間充質(zhì)相互作用機(jī)理的研究提供新的模型，對(duì)毛囊生物學(xué)的研究也具有重要理論意義和參考價(jià)值。 本試驗(yàn)研究材料為18頭胚齡E85-280d的公牛胚胎及五對(duì)2～3歲成年

2、公牛角。通過(guò)對(duì)胎牛角原基與成年牛角真皮進(jìn)行組織切片HE染色、β-catenin的免疫組織化學(xué)以及構(gòu)建生長(zhǎng)期牛角真皮乳頭cDNA表達(dá)文庫(kù)，初步研究了胎牛角原基的形態(tài)變化過(guò)程及成年牛角真皮結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，檢測(cè)了β-catenin在各胚齡胎牛角原基中的表達(dá)，并對(duì)其在角原基形態(tài)發(fā)生過(guò)程中的作用進(jìn)行了探討，為進(jìn)一步研究真皮乳頭的功能基因在牛角形態(tài)發(fā)生中的作用也奠定了基礎(chǔ)。結(jié)果和結(jié)論如下： 1、組織切片HE染色結(jié)果表明：角原基表皮厚度隨胎齡增加逐

3、漸變薄，表皮細(xì)胞形態(tài)由規(guī)則向不規(guī)則過(guò)渡，毛囊發(fā)育較身體其它部位早，且體積較大。牛胚胎早期(E85～140d)，角原基表皮平均厚度最大，基底層細(xì)胞為單層柱狀，其他細(xì)胞呈多邊形，細(xì)胞核質(zhì)比??；牛胚胎中期至中后期(E141～210d)，表皮平均厚度逐漸減小，細(xì)胞體積亦減小，仍然呈多邊形，核質(zhì)比增大，大部分毛囊已發(fā)育成熟，毛干正在形成或已經(jīng)頂出皮膚；牛胚胎后期(E211～280d)，表皮總厚度最薄，但角質(zhì)層增厚，細(xì)胞形狀不規(guī)則，表皮各層結(jié)構(gòu)界限

4、模糊。成年牛角真皮厚度由角根部向上逐漸變薄，到頂部又變厚，其表面有很多真皮乳頭，角基部的乳頭短而密，向上則逐漸變長(zhǎng)變稀，至角頂部又變密。真皮乳頭緊緊嵌入角質(zhì)外殼內(nèi)層壁中。 2、β-catenin免疫組化研究表明：角原基β-catenin的表達(dá)隨胎齡的增加從表皮基底層細(xì)胞到所有表皮細(xì)胞，且陽(yáng)性逐漸增強(qiáng)，毛囊持續(xù)表達(dá)β-catenin。牛胚胎早期，D．catenin在基底層細(xì)胞胞漿表達(dá)為陽(yáng)性，其它表皮細(xì)胞膜表達(dá)呈陽(yáng)性而胞漿為弱陽(yáng)性，

5、毛囊隆突區(qū)、毛母質(zhì)和外根鞘均有表達(dá)；牛胚胎中期，β-catenin在所有表皮細(xì)胞胞漿及部分細(xì)胞核中為陽(yáng)性，其表達(dá)持續(xù)存在于毛囊隆突區(qū)、毛母質(zhì)和外根鞘，且外根鞘表達(dá)增強(qiáng)；牛胚胎后期，β-catenin的表達(dá)為強(qiáng)陽(yáng)性，毛囊結(jié)構(gòu)及其中β-catenin的表達(dá)均未發(fā)生明顯變化。 3、成功構(gòu)建了牛角真皮乳頭cDNA表達(dá)文庫(kù)，初級(jí)文庫(kù)的庫(kù)容量為6.07x10<'5>，重組率高達(dá)93％，擴(kuò)增后，文庫(kù)滴度為4×10<'5>pfu/ml。根據(jù)美國(guó)