梨果實cDNA文庫的構(gòu)建.pdf

1、人類基因組計劃(HGP)的開展和實施,帶來了生物技術(shù)上的革命.一些相關(guān)的學(xué)科,例如生物信息學(xué)、比較基因組學(xué)、結(jié)構(gòu)基因組學(xué)、功能基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)運而生.隨著人類和一些重要模式生物測序任務(wù)的相繼完成,其相應(yīng)的研究任務(wù)已經(jīng)由結(jié)構(gòu)基因組學(xué)研究轉(zhuǎn)向功能基因組學(xué)研究.梨基因組研究在人類基因組和其他一些模式植物基因組計劃的影響下,正在采用結(jié)構(gòu)和功能基因組研究并重的技術(shù)路線,不斷完善遺傳圖譜飽和密度的同時,努力加強(qiáng)梨功能基因組學(xué)研究,為利用基因工

2、程技術(shù)進(jìn)行梨的遺傳改良,滿足人們?nèi)找嬖鲩L的果品需求奠定堅實的基礎(chǔ).該試驗通過吸光比值分析和凝膠電泳比較了改進(jìn)異硫氰酸胍法、熱硼酸法、改良CTAB法和Qiagen Rneasy試劑盒四種提取總RNA的方法提取梨果實組織總RNA的可行性.結(jié)果表明:改進(jìn)異硫氰酸胍法獲得的總RNA純度高、完整性好.其吸光比值的比值OD<,260>/OD<,280>在1.7~2.0之間,OD<,260>/OD<,230>大于2.電泳檢測顯示28S、1 8SrRN

3、A條帶清晰,且28S亮度明顯大于18S.其它方法提取的總RNA吸光比值OD<,260>/OD<,280>均小于1.7,OD<,260>/OD<,230>均小于2.0.說明產(chǎn)物中有不同程度的多糖、多酚和蛋白的污染.利用M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶把總RNA中的mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA,并合成雙鏈cDNA.然后用SPIN-400Column對cDNA進(jìn)行分級分離,去除小于500bp的cDNA片段.在雙連cDNA兩端加上接頭,與載體λ gt11連接,用