Poly I：C誘導草魚cDNA表達文庫的構建.pdf

1、隨著水產養(yǎng)殖業(yè)養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大，養(yǎng)殖模式的不斷改革，與此而來的魚類病害問題也日益突出和嚴重，尤其是由病毒引起的大規(guī)模暴發(fā)性傳染病更是給水產養(yǎng)殖業(yè)帶來了沉重的打擊，每年由此造成的損失非常驚人，嚴重危害了水產養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。干擾素具有廣譜的抗病毒作用，在治療一些人類病毒病時取得了良好的效果。實踐證明運用體外表達的重組干擾素不會對宿主和環(huán)境產生危害，因此利用廣譜的抗病基因進行魚類疾病防治可能最有發(fā)展前途。 自20世紀70年代中期首

2、例cDNA克隆問世以來，構建cDNA文庫已成為研究功能基因組學的基本手段之一。可以從cDNA文庫中篩選到所需的目的基因，并直接用于該目的基因的表達。通過構建cDNA表達文庫不僅可保護瀕危珍惜生物資源，而且可以提供構建分子標記連鎖圖譜的所用探針，更重要的是可以用于分離全長基因進而開展基因功能研究。因此，cDNA在研究具體某類特定細胞中基因組的表達狀態(tài)及表達基因的功能鑒定方便具有特殊的優(yōu)勢，從而使它在個體發(fā)育、細胞分化、細胞周期調控、細胞衰

3、老和死亡：調控等生命現(xiàn)象的研究中具有更為廣泛的應用價值，是研究工作中最常使用到的基因文庫。 構建誘導后的草魚cDNA文庫，可以大量獲得免疫基因，對于研究草魚的非特異性免疫和與之相關的干擾素系統(tǒng)有很大的幫助。 方法：用Poly I:C注射草魚，誘導其表達大量的免疫基因。然后提取RNA，用加了HA接頭的Oligo(dT)做引物，引導cDNA第一鏈的合成，并在加完雙鏈EcoR I接頭后進行cDNA雙鏈的PCR擴增，得到了cDN

4、A PCR Library。然后將加了EcoR I接頭的cDNA連接到用EcDR I內切酶處理過的質粒載體里，構建了PolyI：C誘導后的草魚cDNA文庫。隨后設計引物在該文庫中對Zα cDNA片段和干擾素cDNA進行篩選。 結果：構建的cDNA PCR Library的大小平均在1.5kb左右，達到建庫的基本要求，而且經(jīng)免疫基因檢驗完整性較好?？寺〉玫降腪α cDNA片段大小在480bp左右，與CaPKR-like基因進行比對