牛睫毛毛囊的形態(tài)發(fā)生與生長期毛乳頭cDNA文庫構(gòu)建.pdf

1、毛囊是生長毛發(fā)的動態(tài)器官，由多種分化程度不同的表皮細胞和間充質(zhì)細胞構(gòu)成。毛乳頭是特化的間充質(zhì)細胞，在毛囊的形態(tài)發(fā)生及周期性生長調(diào)控中起著重要作用，是“毛囊周期鐘”的“中心振蕩器”。Wnt/β-catenin信號通路對誘導(dǎo)毛囊的形態(tài)發(fā)生、維持毛囊周期中干細胞增殖分化至關(guān)重要。睫毛毛囊是一種特殊的毛囊，其生長期較短而休眠期極長，因此睫毛生長緩慢。睫毛的直徑是由其毛乳頭決定的。目前國內(nèi)外有關(guān)睫毛毛囊發(fā)育及周期調(diào)控機制的研究報道極少，幾乎屬于空

2、白。研究睫毛毛囊的形態(tài)發(fā)生及其毛乳頭在周期調(diào)控中的作用機制不僅對闡明上皮一間充質(zhì)相互作用的分子機制具有重要的理論意義，而且對了解組織器官發(fā)育和再生具有普遍的指導(dǎo)意義。 本試驗以胎牛作為試驗材料，通過對牛胚胎上眼瞼組織石蠟切片進行β-catenin的免疫組化染色，定性檢測了β-catenin在各胚齡胎牛睫毛毛囊中的表達，初步研究了牛睫毛毛囊形態(tài)發(fā)生的組織學(xué)變化與β-catenin的表達變化規(guī)律；同時還構(gòu)建了新生荷斯坦牛睫毛毛囊生長

3、期毛乳頭cDNA表達文庫。結(jié)果和結(jié)論如下： 1．牛睫毛毛囊的形態(tài)發(fā)生過程與相鄰的非睫毛毛囊相似，但基板和毛芽出現(xiàn)的時間較早。基板和毛芽于胚齡12～14周出現(xiàn)；毛釘出現(xiàn)于14～16周并于16～20周進一步分化；24～28周毛囊完全成熟。成熟睫毛毛囊的毛乳頭直徑較大，附屬結(jié)構(gòu)皮脂腺極為發(fā)達。 2．β-catenin的表達變化提示其在牛睫毛毛囊基板的形成以及毛囊干細胞的分化等過程中具有重要作用。β-catenin在毛囊發(fā)育早期

4、(12～14周)和中期(14～20周)表達于睫毛毛基、毛芽和毛釘中，其中在隆突區(qū)及毛母質(zhì)中強表達；毛囊發(fā)育晚期(20～24周)及成熟期(24～28周)于隆突區(qū)、內(nèi)外根鞘近隆突區(qū)強表達，而在毛母質(zhì)中表達減弱。 3．首次成功構(gòu)建新生荷斯坦牛睫毛毛囊生長期毛乳頭cDNA表達文庫。經(jīng)檢測，所構(gòu)建初級文庫滴度為2．3×10<'5>pfu/mL，重組率為95％；擴增文庫滴度為3．3×lO<'7>pfia6nL。文庫滴度>10<'5>pfu/