果蠅神經(jīng)特異性的miR-315功能的初步研究.pdf

1、神經(jīng)系統(tǒng)的生長、發(fā)育與分化的調(diào)控機制是非常復雜的,microRNAs(miRNAs)作為近年來發(fā)現(xiàn)的一類新的具有調(diào)控作用的RNA,調(diào)控著生物體的整個發(fā)育和生長過程。這一類新發(fā)現(xiàn)的廣泛存在于多細胞生物中的非編碼RNA,通常長度約為19～25nt,能夠通過與靶mRNA的3'UTR不完全的堿基配對引起靶mRNA的降解或者翻譯的抑制,從而在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控基因的表達。miR-315是果蠅神經(jīng)系統(tǒng)特異的miRNA,在安蚊、蜘蛛以及果蠅中高度保守。生物

2、信息學預測,miR-315能與果蠅神經(jīng)系統(tǒng)中多個靶基因相互作用,本文利用果蠅為模型,在細胞水平和在體水平篩選與miR-315相互作用靶基因,為進一步探討miR-315在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中的生物學功能奠定基礎。 首先,針對一個miRNA可能調(diào)控多個靶基因,我們結合三種生物信息學的預測軟件和果蠅大腦基因的表達數(shù)據(jù)庫,選擇了與miR-315可能相互作用的camkII、mnb、hig、hair等九個靶基因。我們構建了在果蠅S2細胞內(nèi)能過

3、表達miR-315的重組質(zhì)粒以及九個靶基因的3'UTR和熒光素酶報告基因融合重組質(zhì)粒,在果蠅S2細胞內(nèi)檢測了miR-315過表達對熒光素酶活性的影響,分析miR-315對這兒個靶基因的調(diào)控作用。結果顯示,當過表達miR-315時,與kr、fmr、hair、mnb、slo等五個基因3'UTR融合表達的熒光素酶的活性明顯下調(diào)。 其次,構建了一株過表達miR-315的p因子插入果蠅,經(jīng)平衡p因子插入在三號染色體,分別用不同的Ga14對