多巴胺相關神經特異性轉錄因子DAT1功能的初步研究.pdf

1、多巴胺(Dopamine,DA)可以激活膠質細胞,活化后的膠質細胞對多巴胺支配的神經元有保護作用.為了解DA作用于膠質細胞的分子機制,獲得DA系統(tǒng)相關基因,該室利用消減抑制雜交和同源克隆技術,克隆并鑒定了星形膠質細胞在多巴胺作用下發(fā)生反應性變化時差異表達的基因,獲得了兩條DA調節(jié)表達的新基因,多巴胺相關轉錄因子(Dopamine-associate trscription factor,DAT1,GenBank＃AF258348)是在此

2、研究中獲得的DA調節(jié)膠質細胞上調表達的基因之一.生物信息學分析表明,該基因是僅有兩個LIM結構域的LIM家族轉錄調節(jié)因子,該蛋白分子中除LIM結構域外無其他同源序列,屬于LIM蛋白超家族中的LIM-only(LMO)亞家族.LIM結構域由兩個串聯(lián)的富含半胱氨酸的鋅指基元組成,在進化中十分保守.目前已證實LIM蛋白可通過其LIM結構域介導蛋白與蛋白之間的相互作用,從而在機體的生長發(fā)育、分化及細胞骨架的組織中發(fā)揮非常重要的作用.LIM蛋白可

3、分為四類,其中LIM-HD蛋白可與DNA結合,具有轉錄因子的活性,可調節(jié)多種信號途徑,它們在細胞命運決定和器官的發(fā)育過程中起重要作用.LIM-HD蛋白相比,LMO蛋白在機體的發(fā)育中發(fā)揮了更重要的作用.此外,它還與腫瘤的發(fā)生有關.現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的脊椎動物的LMO亞家族的4個成員中,LMO1和LMO2基因表達于未成熟的T細胞中會阻止T細胞的進一步分化和成熟,它們的不正常表達可導致T細胞白血病,而且LMO2的表達與病情的惡化程度成正相關,進一步研究

4、發(fā)現(xiàn)LMO2是血細胞發(fā)生的主要調節(jié)因子,它可能在多能干細胞階段發(fā)揮作用;LMO4的表達受乳腺上皮細胞的發(fā)育調節(jié),并在乳腺癌中上調表達,它可與CtIP(CtBP-interacting protein)和乳腺腫瘤抑制蛋白BRCA1(Breast cancer 1)相互作用形成復合體并抑制BRCA1的活性,從而導致乳腺癌的發(fā)生;最近的研究發(fā)現(xiàn)LMO4可與Deaf-1發(fā)生相互作用,并在影響神經管閉合的神經通路中有重要作用;還有研究者將LMO1

5、、LMO3、LMO4基因分別敲除,發(fā)現(xiàn)不同基因缺失后小鼠的形態(tài)及功能變化不同,表明LMO亞家族中的成員分別在不同的發(fā)育途徑中有重要作用.DAT1從結構上看屬于LMO家族,為初步了解DAT1的功能,該文應用原位雜交、RT-PCR、熒光定量RT-PCR、神經干細胞轉染及酵母雙雜交法等方法,從組織、細胞、分子水平對DAT1的功能進行較全面的研究,通過該課題的研究不僅能初步明確DAT1在中樞神經系統(tǒng)(central nervous system