大豆根特異性表達基因GmRLK1的克隆與功能的初步研究.pdf

1、大豆(Glycine max(L.) Merr)是世界上主要的糧食和油料作物，是人類食物中植物蛋白質的主要來源。根是植物長期適應陸地生活而在進化過程中逐漸形成的器官，構成植物體的地下部分，根的主要作用是固定植物體，并從土壤里吸收水分和無機鹽，提供地上部分生長所需要的養(yǎng)分。一些不良的自然條件如干旱，水澇，鹽害等等都與植物的根有著密切的關系，而且大豆的根具有固氮作用。所以根特異表達基因的研究不僅對植物的生長發(fā)育過程以及大豆逆境基因工程育種有

2、著重要的利用價值，也為抗病抗蟲基因工程、發(fā)育調控、固氮等多方面提供更豐富的理論資料。
　　 本研究的主要內容有:
　　 (1)通過比較基因組學和生物信息學的方法，以苜蓿類受體蛋白激酶(RLKs)基因Srlk的序列作為種子序列，在大豆基因組數(shù)據(jù)庫搜索同源性高的基因片段，命名為GmRLK1。苜蓿的基因Srlk已經(jīng)被證實是與逆境脅迫條件有關的基因，Genebank中的Blast分析表明，GmRLK1與其的同源性序列高達80.0

3、％，對基因GmRLK1序列結構特征、蛋白結構進行了預測分析，結果顯示基因GmRLK1編碼的蛋白具有植物類受體蛋白激酶結構域，進一步發(fā)現(xiàn)它是具有富含亮氨酸重復序列的植物蛋白激酶(LRR-RLK)結構域特征的基因。對大豆基因GmRLK1進行組織表達分析，半定量RT-PCR分析結果表明這個基因主要在根中表達，在莖和葉的表達水平較低。本實驗構建大豆富含亮氨酸重復序列類受體蛋白激酶基因GmRLK1的RNA干擾表達載體pB7GWIWG2(Ⅱ)-Gm

4、RLK1。
　　 (2)選用大豆無菌苗，苗齡為5-7d為外植體。以無菌苗的子葉、子葉節(jié)、下胚軸、幼葉為外植體，分別考察了外植體、培養(yǎng)基、預培養(yǎng)時間等不同理化因素對大豆品種Jack毛狀根誘導率的影響。得出了Jack品種最佳誘導條件:MS培養(yǎng)基，預培養(yǎng)2d，K599菌液搖床震蕩30 min，AS100μM/L，子葉節(jié)為外植體時誘導率最高，可到達92.50％。
　　 (3)用發(fā)根農桿菌介導法向大豆根系導入GmRLK1基因，通過